石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株基因分型及耐藥性分析.pdf

1、目的:對石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進行基因分型研究和藥物敏感性試驗，分析了石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因多態(tài)性和分子流行病學(xué)特征，及石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的耐藥情況以及耐藥菌株基因分型特征，有助于對石家莊地區(qū)結(jié)核病的流行發(fā)展趨勢的充分了解，為結(jié)核病的有效防治提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:收集2014年1月至2014年10月期間在石家莊市第五醫(yī)院就診的結(jié)核病患者經(jīng)臨床分離培養(yǎng)得到的結(jié)核分枝桿菌菌株及相應(yīng)病例背景資料，采用PN

2、B/TCH初步鑒別法和多位點PCR(Multi-locusPCR)進行菌種鑒定。采用比例法進行一線抗結(jié)核藥（鏈霉素、異煙肼、利福平、乙胺丁醇）的藥物敏感性試驗。應(yīng)用間隔區(qū)寡核苷酸基因分型(Spoligotyping)和15位點數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列分析(VNTR)進行菌株的基因分型。運用BioNumerics5.0軟件進行聚類分析，運用SPSS16.0軟件進行Hunter-Gaston分辨指數(shù)(HGDI)計算和卡方檢驗（計數(shù)資料）、t檢驗

3、（計量資料）等數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果:
　　1、收集到石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)陽性共373株，經(jīng)過PNB/TCH和多位點PCR實驗證實為結(jié)核分枝桿菌有367株和非結(jié)核分枝桿菌6株。
　　2、間隔區(qū)寡核苷酸基因分型法(Spoligotyping)
　　367株結(jié)核分枝桿菌呈現(xiàn)明顯的基因多態(tài)性。通過比對SpolDB4.0數(shù)據(jù)庫，可分為2個基因群，即北京家族(Beijing family)和非北京家族(Non-Beij

4、ing family)，分別占91.3％(335/367)和5.7％(21/367)。有11株(3.0％)的基因型不能被SpolDB4.0數(shù)據(jù)庫所識別，可能為新的基因型。北京家族菌株中99.4％(333/335)為典型北京家族（Typical Beijing family），表現(xiàn)為僅與35～43之間的9個間隔區(qū)呈現(xiàn)陽性雜交反應(yīng);其余菌株在35～43之間有1～4個位點呈現(xiàn)陰性雜交反應(yīng)，稱為非典型北京家族(AtypicalBeijing f

5、amily)或北京樣基因型(Beijing-like family)。非北京家族菌株表現(xiàn)出高度的基因多態(tài)性，包括T基因型，占66.7％(14/21);MANU基因型，占14.3％(3/21);LAM基因型，占14.3％(3/21);H基因型，占4.7％(1/21)。經(jīng)BioNumerics軟件聚類分析，全部29種基因型包含10個簇和147種獨特基因型（單一菌株類型）。其中最大的一個簇含331株(90.2％)，為北京家族基因型。Spoli

6、gotyping對所有菌株的HGDI值為0.2486。
　　3、數(shù)目可變串聯(lián)重復(fù)序列分析(VNTR)
　　經(jīng)BioNumerics軟件聚類分析，367株結(jié)核分枝桿菌可分為194種VNTR基因型，其中221(60.22％)株菌可被聚類為48個簇，146(39.78％)種基因型為獨特基因型;335株北京家族菌株呈現(xiàn)161種VNTR基因型，其中219(65.37％)株可聚為45個簇，116(34.63％)為獨特基因型。VNTR對所

7、有菌株的HGDI值為0.9838，VNTR和Spoligotyping聯(lián)合使用時，HDGI值為0.9853。
　　4、石家莊地區(qū)2014年結(jié)核分枝桿菌的總耐藥率為31.61％(116/367)，其中初始耐藥率為24.47％(69/282)，獲得性耐藥率為55.29％(47/85)。獲得性耐藥率明顯高于初始耐藥率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=28.71，P＜0.05)。耐藥株中，單耐藥36株，占9.80％;耐多藥或耐兩種以上藥物的多耐藥

8、菌株80株，占21.81％。
　　5、根據(jù)聚類分析結(jié)果，將367株結(jié)核分枝桿菌分為成簇類型和單一類型（非成簇類型）;根據(jù)藥物敏感試驗結(jié)果，將367株結(jié)核分枝桿菌按照敏感和耐藥分類。結(jié)果顯示:敏感菌株和耐藥菌株在成簇類型和單一類型的分布差異無統(tǒng)計學(xué)意義(x2=0.084，P=0.773)。成簇類型和單一類型差異在性別、年齡、職業(yè)、治療史和耐藥情況等方面均不存在統(tǒng)計學(xué)差異(P值均＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、石家莊地

9、區(qū)結(jié)核分枝桿菌的基因型存在明顯的多態(tài)性，其最主要流行菌株是北京家族型，發(fā)現(xiàn)了11株新的Spoligotyping基因型，可進一步完善Spoligotyping數(shù)據(jù)庫的菌株信息。
　　2、VNTR-15基因分型法的分辨能力高于Spoligotyping基因分型法的分辨能力，聯(lián)合使用VNTR-15和Spoligotyping的分辨能力更高。提示聯(lián)合采用Spoligotyping和VNTR這兩種分型方法能夠全面分析結(jié)核分枝桿菌的基因多態(tài)

10、性。本研究采用的15個VNTR位點適合石家莊地區(qū)結(jié)核分枝桿菌基因分型研究。
　　3、石家莊地區(qū)2014年結(jié)核分枝桿菌的總耐藥率和初始耐藥率與全國平均水平持平，但獲得性耐藥率處于較高水平。提示石家莊地區(qū)結(jié)核耐藥狀況比較嚴重，需進一步加強耐藥結(jié)核人群的監(jiān)測和管理，提高患者治療依從性。同時應(yīng)規(guī)范臨床抗生素的使用，降低獲得性耐藥的發(fā)生率。
　　4、在所有菌株中，成簇類型和單一類型菌株在不同的性別、年齡、職業(yè)和治療史中的分布差異無統(tǒng)計