制何首烏活性成分體內外代謝性質研究.pdf

1、何首烏是蓼科植物何首烏 Polygonum multijiorum（PM）的干燥塊根，臨床多以制何首烏入藥，何首烏具有延緩衰老、提高記憶力、調節(jié)血脂、抗動脈粥樣硬化和烏發(fā)等作用。在中藥處方和已上市中成藥中廣泛應用。然而，近年來關于服用何首烏引起肝臟毒性的報道日益增加，但何首烏致肝損傷的確切機制和毒性物質基礎尚不完全明了。盡管有研究表明，何首烏的肝毒性與其活性成分在體內的代謝活化有關，但目前關于何首烏活性成分的體內外代謝性質研究尚不系統(tǒng)。

2、
　　為此，本課題以制何首烏的活性成分大黃素（EM）、二苯乙烯苷（TSG）和蘆薈大黃素（AE）為研究對象，應用可同時定量檢測生物樣品中3個活性成分的LC-MS/MS方法，開展制何首烏活性成分的血漿藥代動力學、組織分布，尿液、糞便和膽汁排泄研究。在體外肝微粒體和重組酶孵育體系以及 Caco-2細胞模型上，評價制何首烏活性成分在肝微粒體的體外代謝性質和轉運性質，為何首烏的藥理毒理研究以及臨床應用提供實驗數據和依據。
　　本課題首

3、先建立并驗證了同時定量檢測制何首烏中 EM、AE和 TSG的LC-MS/MS方法，在樣品前處理中應用特異性酶水解，對活性成分的葡糖醛酸結合物進行間接定量。方法學驗證的結果表明，該方法靈敏可靠，能滿足生物樣品的定量分析要求。
　　大鼠單次灌胃0.5 g/kg制何首烏醇提取物后，觀察到EM和AE吸收和消除迅速，血藥濃度均在1 h達到峰值，t1/2分別為0.5 h和0.4 h，在血漿中可檢測到大量EM和AE的葡糖醛酸結合物，其血藥濃度峰

4、值分別為EM和AE的18.4和19.8倍；TSG的血藥濃度較低，原型和葡糖醛酸結合物的Cmax分別為(39.1±23.3) ng/mL和(61±34.4) ng/mL，血藥濃度分別在0.25 h和1 h達峰，隨后迅速消除。大鼠灌胃給藥EM或AE單體后，EM和AE原型吸收迅速，它們的葡糖醛酸結合物也是血漿中的主要成分，濃度顯著高于原型。與提取物給藥組相比，EM和AE原型的血漿消除顯著減慢，消除半衰期和體內滯留時間顯著延長，相對應的，它們的

5、葡糖醛酸結合產物的血漿濃度低于提取物。
　　膽管插管大鼠口服制何首烏提取物后，在膽汁中可檢測到EM、AE和TSG的原型及其葡糖醛酸結合物，它們的72 h總膽汁累積排泄率分別為49.5％、48.7%和1.6%，表明膽汁排泄是EM和AE的主要清除途徑之一。大鼠口服EM或AE單體后，EM和AE的72 h膽汁累積排泄率分別為37.7%和7.3%。與提取物給藥組相比，EM及AE的膽汁排泄均顯著降低。EM、AE和TSG在Caco-2細胞上的透

6、膜性良好；應用轉運體膜-ATP酶實驗，發(fā)現EM和AE可能是BCRP的底物。將BCRP特異性抑制劑KO143與制何首烏提取物給大鼠同服，觀察到抑制劑能顯著降低制何首烏提取物中EM和AE原型的累積膽汁排泄率，表明外排轉運體參與了EM和AE的膽汁外排。
　　大鼠灌胃制何首烏提取物后，EM、AE和TSG能廣泛地分布到各組織器官，大部分組織的分布濃度在0.25 h達峰；EM和AE的原型在肝臟和腎臟的暴露濃度最高，它們的葡糖醛酸結合物在血漿的

7、暴露濃度較高；EM和AE的72 h總尿液累積排泄率分別為13.1%和9.4%，總糞便累積排泄率為14.0%和14.3%，原型是其主要排泄形式；TSG在大鼠體內代謝廣泛，給藥1 h后的組織樣品和給藥后的排泄物中檢測不到其原型和結合物。
　　在人和大鼠肝微粒體中，EM和TSG能發(fā)生I相CYP酶介導的代謝和II相葡糖醛酸結合反應，它們的清除率有一定種屬差異；AE在人肝微粒體中以NADPH依賴的I相代謝為主，在鼠肝微粒體中同時存在I相代謝

8、和II相結合反應，在反應類型上存在種屬差異。肝微粒體代謝動力學參數表明，EM、AE和TSG在人和大鼠微粒體中代謝消除迅速，在鼠肝微粒體中的清除率CLint均顯著高于人肝微粒體。
　　代謝表型研究表明，EM和 AE的 I相代謝由多個 CYP同工酶介導，參與EM代謝的主要同工酶為CYP1A2、2C9和3A4，代謝貢獻率均大于20%；參與AE代謝的主要同工酶為CYP1A2、2B6、2C19和3A4，其中CYP1A2和3A4對AE代謝的貢

9、獻率大于20%。EM的II相代謝主要由UGT1A1、1A8、1A10、2B7介導。EM和AE對CYP同工酶有抑制作用，分別為CYP1A2的強抑制劑和中等強抑制劑，所以EM和AE與CYP1A2的底物藥物合用時應注意可能產生的藥-藥相互作用。
　　綜上所述，制何首烏活性成分EM、AE和TSG口服吸收迅速，可在肝臟和腎臟分布富集，代謝消除迅速。在大鼠，EM和AE均可經CYP和UGT酶介導代謝，并可能經轉運體BCRP介導，主動外排進入膽汁