阿魏酸對UVA致人成纖維細(xì)胞光老化的抑制作用研究.pdf

1、背景和目的:
　　皮膚衰老包括內(nèi)源性自然衰老和受環(huán)境因素影響的外源性衰老，后者主要是由于紫外線輻射所致稱光老化。長波紫外線(UVA，320～400nm)是產(chǎn)生皮膚光老化的主要因素。UVA主要作用于真皮中的成纖維細(xì)胞。光老化時皮膚組織結(jié)構(gòu)、含水量、光滑度、彈性和順應(yīng)性均下降。組織學(xué)表現(xiàn)為表皮有厚度變化如萎縮或增生，并伴有真皮細(xì)胞及基質(zhì)的改變。皮膚的老化影響美觀，引起患者生活質(zhì)量的下降，隨著環(huán)境污染的日益加重，如何預(yù)防和延緩皮膚老化是

2、關(guān)注和研究的熱點。
　　研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β是一大類多功能的細(xì)胞生長增殖調(diào)節(jié)蛋白，對細(xì)胞的生長、分化和免疫功能都有重要的調(diào)節(jié)作用，其中TGF-β1可刺激成纖維細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)如膠原蛋白的表達(dá)和抑制ECM的降解?；|(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)可以降解Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和X型結(jié)締組織膠原，導(dǎo)致膠原變性，破壞ECM的正常結(jié)構(gòu)和生理功能。金屬蛋白酶組織抑制劑(TIMP)是MMPs的主要內(nèi)源性抑制物，其中TIMP

3、-1與活化的MMP-1非共價結(jié)合抑制MMP-1的活性。此外，p66Shc是調(diào)控細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)和ROS產(chǎn)生的重要基因，參與了氧化應(yīng)激和細(xì)胞衰老相關(guān)信號通路。故TGF-β1、MMP-1、TIMP-1、p66Shc在皮膚光老化的發(fā)生和發(fā)展過程中都起著重要作用。
　　由于藥效明確及較少的副作用，從天然植物和傳統(tǒng)藥物中提取的新型防光藥物受到越來越多的重視。阿魏酸(Ferulic Acid)存在于川芎、當(dāng)歸等活血化瘀中藥材中。阿魏酸具有抗血栓形

4、成、消炎止痛及很強的抗氧化、清除自由基以及細(xì)胞保護(hù)作用。既往我們已對阿魏酸的抗紫外線作用進(jìn)行了初步研究，發(fā)現(xiàn)它能夠有效抑制長波紫外線(UVA，320～400nm)和中波紫外線(UVB，290～320nm)對人皮膚細(xì)胞（包括角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞）的氧化損傷，提高細(xì)胞氧化防御能力。然而，阿魏酸是否也可以減輕UVA輻射所引起的光老化？故我們在本研究中采用UVA輻射以及阿魏酸預(yù)孵育作用于人皮膚成纖維細(xì)胞，觀察UVA致細(xì)胞老化效應(yīng)和阿魏酸干預(yù)

5、對此過程的影響，以探討其作用機(jī)制。
　　方法:
　　分離培養(yǎng)人原代成纖維細(xì)胞，分為空白組、阿魏酸組、UVA組和UVA+阿魏酸組。以UVA照射細(xì)胞，照光劑量為10J/cm2，其中藥物干預(yù)組于照光前后加入200μg/mL阿魏酸孵育。照光后于不同時間段收集細(xì)胞進(jìn)行檢測。
　　1.組織化學(xué)染色法檢測衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-galactosidase，SA-β-Gal)表達(dá)。

6、　　2.酶聯(lián)免疫吸附法檢測上清液中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)含量。
　　3.實時定量PCR(real-time PCR)法檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrixmetalloproteinase-1，MMP-1)、金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissue inhibitor ofmetalloproteinase-1，TIMP-1)和p66shcmRNA表達(dá)水平變化

7、。
　　結(jié)果:
　　1.正常細(xì)胞組及單純阿魏酸組β-半乳糖苷酶陽性細(xì)胞均較低，UVA組β-半乳糖苷酶陽性細(xì)胞數(shù)則顯著升高，加入阿魏酸處理可使β-半乳糖苷酶陽性細(xì)胞比率明顯降低。
　　2.單純阿魏酸處理可以促進(jìn)TGF-β1分泌;UVA照射使TGF-β1分泌量明顯降低，加入阿魏酸干預(yù)可增加TGF-β1分泌量。
　　3.UVA能夠誘導(dǎo)MMP-1、TIMP-1和p66ShcmRNA表達(dá)水平升高，而阿魏酸可在一定程度上抑制