天然水蛭素對(duì)肌腱成纖維細(xì)胞抑制作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：在藥物防治肌腱粘連的攻堅(jiān)戰(zhàn)中，中藥及中藥提取物因?yàn)槠滹@著的效果而受到大量研究。天然水蛭素作為一種活血化瘀的傳統(tǒng)中藥，近來(lái)被廣泛應(yīng)用于研究抑制各種成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，特別應(yīng)用于預(yù)防燒傷后的皮膚疤痕增生具有十分顯著的療效。本實(shí)驗(yàn)旨在通過(guò)對(duì)天然水蛭素在抑制肌腱成纖維細(xì)胞過(guò)程中作用及其機(jī)制的研究，為后期進(jìn)一步深刻揭示天然水蛭素預(yù)防肌腱粘連的作用機(jī)理提供詳實(shí)、客觀和科學(xué)的依據(jù)，為研究天然水蛭素對(duì)人成纖維細(xì)胞的抑制作用提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為臨床推

2、廣中藥及中藥制劑防治術(shù)后肌腱粘連提供幫助。
　　方法：體外培養(yǎng)兔肌腱成纖維細(xì)胞，將濃度為0、1、10、100U/ml的天然水蛭素作用于兔肌腱成纖維細(xì)胞，觀察成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;采取MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性，觀察不同濃度天然水蛭素對(duì)肌腱成纖維細(xì)胞增殖的抑制作用;運(yùn)用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)的表達(dá)含量，研究天然水蛭素抑制肌腱

3、成纖維細(xì)胞作用的機(jī)制機(jī)理。
　　結(jié)果：1.天然水蛭素濃度為1U/ml，10U/ml，100U/ml時(shí)，MTT法測(cè)定肌腱成纖維細(xì)胞的吸光度(A)值分別為：0.42±0.05，0.41±0.28，0.35±0.26，均低于對(duì)照組(0U/ml)：0.52±0.17，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.天然水蛭素濃度為1U/ml，10U/ml，100U/ml時(shí)，ELISA法測(cè)定肌腱成纖維細(xì)胞中TGFβ1的濃度為：289.

4、50±25.60pg/ml，269.56±29.34pg/ml，173.25±56.47pg/ml，均低于對(duì)照組(0U/ml)：398.89±46.70pg/ml，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.天然水蛭素濃度為1U/ml，10U/ml，100U/ml時(shí)，ELISA法測(cè)定肌腱成纖維細(xì)胞中bFGF的濃度為114.50±84.95pg/ml，117.17±79.12pg/ml，273.83±142.88pg/ml，均高

5、于對(duì)照組(0U/ml)：80.40±59.96pg/ml，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.天然水蛭素濃度為1U/ml，10U/ml，100U/ml時(shí)，ELISA法測(cè)定肌腱成纖維細(xì)胞中MMP-2的濃度為2500.75±566.13pg/ml，2580.57±534.90pg/ml，4956.00±792.35pg/ml，均高于對(duì)照組(0U/ml)：1780.50±328.40pg/ml。但較低濃度的天然水蛭素(1U/

6、ml，10U/ml)對(duì)MMP-2的促進(jìn)作用較弱，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而較高濃度的天然水蛭素(100U/ml)對(duì)MMP-2的促進(jìn)作用明顯，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：1.天然水蛭素對(duì)體外培養(yǎng)的兔肌腱成纖維細(xì)胞增殖活性具有抑制作用，并且隨著濃度的增高，抑制作用更加明顯。
　　2.天然水蛭素對(duì)兔肌腱成纖維細(xì)胞TGFβ1的表達(dá)具有抑制作用;對(duì)bFGF、MMP-2的表達(dá)具有促進(jìn)作