碘過量通過誘導(dǎo)Th17細胞分化促進橋本氏甲狀腺炎發(fā)病機制的研究.pdf

1、目的:橋本氏甲狀腺炎是臨床上最常見的引起甲狀腺功能減退的甲狀腺疾病。其發(fā)病機制目前仍未完全闡明。目前已有許多流行病學(xué)證據(jù)證實:橋本氏甲狀腺炎的發(fā)病與碘攝入量過高相關(guān)。但高水平碘劑是如何造成橋本氏甲狀腺炎的發(fā)病,以及在此過程中相關(guān)的細胞、分子事件卻鮮有報道。并且,高水平碘對于機體的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的影響亦不十分清楚。本研究通過檢測與自身免疫性疾病密切相關(guān)的白細胞介素-17在橋本氏甲狀腺炎患者中的表達,確定橋本氏甲狀腺炎發(fā)病的相關(guān)免疫學(xué)基礎(chǔ),進

2、而深入研究碘在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病過程中的細胞和分子機制以及其對機體免疫系統(tǒng)的影響。
　　材料和方法:本研究首先利用流式細胞術(shù)對橋本氏甲狀腺炎患者甲狀腺組織與正常甲狀腺組織中浸潤的淋巴細胞進行分子表型分析,確定淋巴細胞亞型;進而納入了2009年7月至2011年9月至我院甲狀腺乳腺外科、內(nèi)分泌科就診的患者共169名。其中,初診或確診為HT的患者82名,確診為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的患者53名,確診為甲狀腺癌的患者34名以及60位健康志愿者。以

3、免疫酶聯(lián)吸附法(ELISA)測定患者和對照人群血清中白細胞介素-17(IL-17)、TGF-β1、IL-6、IL-1β的含量,并以HT患者口服左旋-甲狀腺素鈉(優(yōu)甲樂)的劑量作為衡量甲狀腺剩余功能的標準,將患者分為三組:處于一過性甲狀腺功能亢進期組,甲狀腺功能部分減退期組(口服優(yōu)甲樂劑量在0~25,25~75μg)及甲狀腺功能大部減退期組(口服優(yōu)甲樂劑量在87.5μg及以上),觀察IL-17在病程的不同階段含量是否發(fā)生變化;對橋本氏甲狀

4、腺炎患者的甲狀腺的局部病理表現(xiàn)與IL-17表達的相關(guān)性進行了分析。
　　為進一步了解碘劑在橋本氏甲狀腺炎發(fā)病中的作用,我們以不同水平碘劑(0,1500,6000,12000,24000μg/L)配合小鼠甲狀腺球蛋白皮下免疫的小鼠甲狀腺炎模型對碘劑的作用進行了初步的探討。C57小鼠隨機分組后,給予不同劑量的碘劑飲水三個月后,再以小鼠甲狀腺球蛋白Tg進行皮下免疫誘發(fā)免疫反應(yīng),利用RT-PCR以及實時定量PCR技術(shù)對小鼠脾臟的IL-17

5、以及IFN-γ含量進行檢測,了解輔助性T細胞的分化情況;利用流式細胞技術(shù)對小鼠脾臟調(diào)節(jié)性T細胞的分布進行了檢測,觀察不同劑量的碘劑對于免疫系統(tǒng)以及免疫反應(yīng)的影響。
　　結(jié)果:橋本氏甲狀腺炎患者甲狀腺組織中Th17細胞比例明顯多于正常甲狀腺組織,而橋本氏甲狀腺炎患者血清IL-17、IL-6、IL-1β的含量亦明顯高于正常對照組;且隨著疾病進程的發(fā)展,甲狀腺功能的逐步喪失,血清IL-17的含量逐步下降。IL-17特異性的表達于HT患者

6、甲狀腺組織中,且呈非勻質(zhì)分布,病理切片顯示:IL-17的表達與甲狀腺纖維化呈正相關(guān)。
　　不同碘劑濃度喂養(yǎng)下的自身免疫性甲狀腺炎小鼠,其脾臟IL-17的含量較對照組相比均升高;同時,IL-17與IFN-γ的表達情況呈反比,即:隨著服用碘劑劑量的增加,IL-17的表達情況呈下降趨勢,而IFN-γ的表達隨著碘劑劑量的增大而逐漸上升;同時,隨著碘劑劑量的增加,小鼠CD3+Foxp3+的調(diào)節(jié)性T細胞含量逐漸降低。
　　結(jié)論:IL-1

7、7可能在HT發(fā)病的初期參與自身免疫過程的發(fā)病,局部IL-17的表達與局部纖維化程度相關(guān)。碘劑對于免疫系統(tǒng)因劑量不同而具有雙重作用:高劑量碘環(huán)境下可以促進Th1細胞反應(yīng);而低劑量碘劑可以促進Th17細胞的分化。甲狀腺局部由于組織特殊性,呈現(xiàn)高碘狀態(tài),促進Th1細胞分化,進而造成以Th1細胞介導(dǎo)的甲狀腺局部組織炎癥破壞,纖維化的病理表現(xiàn)為主的不均質(zhì)組織破壞;而在外周免疫系統(tǒng)中,低劑量碘劑促進Th17細胞的分化,促進系統(tǒng)炎癥的加強,促進甲狀腺

8、炎的發(fā)生。
　　目的:腫瘤炎癥一直以來被認為是促進腫瘤發(fā)生和發(fā)展的關(guān)鍵因素。腫瘤部位的腫瘤炎癥調(diào)節(jié)機制復(fù)雜,包括細胞因子網(wǎng)絡(luò),微小RNA,小分子物質(zhì)或者微顆粒(micorparticles,MPs)的釋放等等,但這些機制均未被充分闡明。近年來發(fā)現(xiàn),腫瘤細胞通過自身表達Toll樣受體(Toll-likereceptor,TLR),促進腫瘤的發(fā)展和轉(zhuǎn)移,介導(dǎo)腫瘤部位的腫瘤炎癥。但是,TLR信號是否同樣具有負性調(diào)節(jié)腫瘤炎癥的作用不得而知

9、。同時,近年來發(fā)現(xiàn)腫瘤細胞可以在受到刺激或者凋亡時通過微顆粒的釋放,調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的免疫反應(yīng)。本研究通過對小鼠肝癌細胞的TLR的信號通路以及其所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng),探討TLR4信號對于微顆粒的釋放的影響,以及其在腫瘤局部炎癥中的負性調(diào)節(jié)作用。
　　材料和方法:首先利用TLR4受體的特異性刺激物脂多糖(LPS)刺激小鼠肝癌細胞系H22,利用流式細胞技術(shù)檢測H22細胞在刺激下的微顆粒釋放情況以及其可能的介導(dǎo)機制;再通過微小RNA基因芯片

10、技術(shù),分析微顆粒中包含的內(nèi)容物的微小RNA的表達情況,尋找差異最大的微小RNA。最后,在體內(nèi)和體外實驗下,觀察TLR4信號通路下釋放的微顆粒所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)以及其中微小RNA的“生物傳遞”作用。
　　結(jié)果:在LPS刺激作用下,H22細胞釋放微顆粒的數(shù)目明顯增多。TLR信號可以通過MyD88通路向下傳遞信號到細胞骨架蛋白,使得肌動蛋白輕鏈磷酸化,導(dǎo)致微顆粒的釋放增多。而腫瘤部位的巨噬細胞在吞噬腫瘤來源的微顆粒后,下調(diào)表達炎癥因子白