水楊酸鈉對LPS刺激后人THP-1細(xì)胞的活性、糖代謝及細(xì)胞因子分泌的影響.pdf

1、【目的】驗(yàn)證水楊酸鈉是否通過激活A(yù)MPK蛋白抑制細(xì)菌脂多糖（LPS）刺激后人單核細(xì)胞THP-1的細(xì)胞活性及糖酵解，并影響炎癥因子的表達(dá)。
　　【方法】
　　1、培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，分別給予或不給不同濃度的LPS及水楊酸鈉刺激THP-1細(xì)胞，培養(yǎng)24h后用MTT、LDH和細(xì)胞流式PI染色的方法檢測細(xì)胞活性，培養(yǎng)8h后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）的方法檢測細(xì)胞因子TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10的mRNA

2、表達(dá)水平，培養(yǎng)24h后用ELISA試劑盒檢測細(xì)胞上清中TNF-α，IL-6，IL-10，IL-1β的含量，培養(yǎng)24h和48h后取細(xì)胞上清檢測細(xì)胞葡萄糖消耗量和乳酸生成量及氧分壓含量。
　　2、培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，分別給予或不給LPS、水楊酸鈉和AMPK蛋白抑制劑compound C處理THP-1細(xì)胞，培養(yǎng)0.5h后用Western blotting的方法檢測磷酸化AMPKα及AMPKα總蛋白水平。
　　3、培養(yǎng)THP-1細(xì)胞

3、，提前半小時(shí)給予AMPK抑制劑compound C處理細(xì)胞后，再給予或不給LPS及水楊酸鈉，培養(yǎng)8h后，用qRT-PCR的方法檢測細(xì)胞因子TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10的mRNA表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　1、MTT實(shí)驗(yàn)、LDH實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞流式PI染色的方法證實(shí)5mM水楊酸鈉可加劇10ug/ml LPS刺激后的THP-1細(xì)胞的死亡；水楊酸鈉可使100ng/ml LPS刺激后的THP-1細(xì)胞IL-1β蛋白的分泌減

4、少，IL-6和IL-10的mRNA表達(dá)量降低，TNF-α的mRNA表達(dá)及蛋白分泌沒有變化；而用10ug/ml LPS刺激細(xì)胞時(shí)，水楊酸鈉可以抑制IL-1β、IL-6和IL-10的mRNA表達(dá)及蛋白分泌，但同時(shí)促進(jìn)了TNF-α的mRNA表達(dá)及蛋白分泌；水楊酸鈉可以減少LPS刺激后THP-1細(xì)胞的葡萄糖消耗量和乳酸生成量。
　　2、LPS刺激后THP-1細(xì)胞的AMPKα蛋白磷酸化水平與正常組相比沒有差異，水楊酸鈉刺激后THP-1細(xì)胞的

5、AMPKα蛋白磷酸化水平比正常組高2.8倍，而LPS+水楊酸鈉組與 LPS組相比 AMPKα蛋白磷酸化水平也升高2.8倍，LPS+水楊酸鈉+compound C組與LPS+compound C組相比AMPKα蛋白磷酸化水平有降低的趨勢，所有組AMPKα總蛋白的相對表達(dá)量沒有明顯變化。
　　3、使用AMPK抑制劑compoundC后，水楊酸鈉對10μg/ml LPS刺激后THP-1細(xì)胞促進(jìn)TNF-αmRNA和抑制IL-10 mRNA

6、表達(dá)的作用消失，而水楊酸鈉對IL-1β和IL-6的抑制作用仍存在。
　　【結(jié)論】
　　1、高濃度水楊酸鈉可以加重大劑量 LPS刺激后 THP-1細(xì)胞的死亡；在小劑量 LPS刺激細(xì)胞時(shí)，水楊酸鈉主要通過抑制 IL-1β的生成發(fā)揮抗炎作用，當(dāng)使用大劑量LPS刺激細(xì)胞時(shí)，水楊酸鈉既能劑量依賴性抑制促炎因子IL-1β和IL-6以及抗炎因子IL-10表達(dá)，又能促進(jìn)促炎因子TNF-α表達(dá)；水楊酸鈉還可以抑制LPS刺激后THP-1細(xì)胞的糖