Tra2β與非小細胞肺癌的相關(guān)性研究.pdf

1、蘇州大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學位論文是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明弓l用的內(nèi)容外，本論文不含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學或其它教育機構(gòu)的學位證書而使用過的材料。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人承擔本聲明的法律責任。論文作者簽名：室竺匣竺日期：矽’≯3’4扣Tra2B與非小細胞肺癌的相關(guān)性研究中文摘要Tra2[3與

2、非小細胞肺癌的相關(guān)性研究中文摘要目的研究Tra213與非小細胞肺癌(non—smallcelllungcancer，NSCLC)臨床病理參數(shù)之間的相關(guān)性以及對NSCLC患者預后的影響，分析Tra213在NSCLC與正常肺組織中的表達差異；研究rra2p對NSCLC細胞生物學行為的影響，探討Tra2p在NSCLC進程中的作用。方法(1)回顧性調(diào)查研究83例NSCLC患者，手術(shù)切除標本通過免疫組織化學實驗檢測NSCLC石蠟切片中Tra2[3

3、和飚一67的表達情況，分析不同臨床病理特征的病例中Tra2[3的表達差異，統(tǒng)計Tra2]3與臨床病理參數(shù)以及細胞核抗原Ki一67的表達的相關(guān)性。Kaplan—Meier分析rra2p的表達水平對于患者存活的影響。Cox多因素分析臨床病理特征以及Tra213和I(i一67表達對于患者存活的影響。(2)收集12對配對的新鮮NSCLC組織和癌旁正常組織，勻漿提取蛋白后，通過免疫印跡的方法檢測Tra213在癌組織和癌旁正常組織中的表達差異，并檢

4、測增殖細胞核抗原(ProliferatingCellNuclearAntigen，PCNA)的表達，分析兩者表達趨勢的關(guān)系。免疫印跡檢測Tra2p在NSCLC細胞(A549)和正常的支氣管上皮細胞(BEAS2B)中的表達差異。(3)將A549細胞進行無血清培養(yǎng)72小時以后恢復血清培養(yǎng)，通過流式細胞儀分析細胞周期的變化。再通過免疫印跡的方法檢測在饑餓釋放的過程中，Tra213的表達變化趨勢。(4)采用shRNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肺癌細胞，檢測干

5、擾效率，挑選效果最好的靶點進行后續(xù)實驗。免疫印跡檢測Tra2[3敲低后對細胞增殖的標記物(Proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)以及凋亡標記物活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinylaspartatespecificproteinase3，caspase3)的表達的影響。流式細胞術(shù)檢測干擾Tra2[3對細胞周期的影響。細胞計數(shù)試劑盒(CellCountingKit，CCK8)檢測Tr