FOXA1與非小細(xì)胞肺癌臨床相關(guān)性的初步研究.pdf

1、【研究背景】
　　肺癌是目前全世界發(fā)病率和死亡率最高且增長最快，對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤。轉(zhuǎn)錄因子(transcriptionfactor)是一群能與基因5`端上游特定序列專一性結(jié)合，從而保證目的基因以特定的強(qiáng)度在特定的時間與空間表達(dá)的蛋白質(zhì)分子。因其存在的廣泛性和調(diào)控靶基因的多樣性，與腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、凋亡、浸潤轉(zhuǎn)移及血管生成等各個環(huán)節(jié)密切相關(guān)。隨著對轉(zhuǎn)錄因子及其作用機(jī)制的深入研究，針對轉(zhuǎn)錄因子活化與抑制從不同環(huán)節(jié)

2、尋找藥物用于靶向治療和預(yù)防與轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控相關(guān)的腫瘤疾病，已成為當(dāng)今新的研究熱點，有望成為研究新型抗腫瘤藥物作用機(jī)制的有效途徑。
　　FOXA1作為一種重要轉(zhuǎn)錄因子，在機(jī)體生長發(fā)育和腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移中起重要作用。其在不同腫瘤中扮演不同的角色。因此，我們研究探索FOXA1與非小細(xì)胞肺癌的臨床相關(guān)性，探討FOXA1作為肺癌治療靶點的可能性。
　　【研究目的】
　　本研究非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本為主要研究對象，研究FOXA1與非小細(xì)

3、胞肺癌的臨床相關(guān)性，探索FOXA1可否成為肺癌發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的有效分子標(biāo)記物及可能的治療靶點。
　　【研究方法】
　　1.用RT-PCR檢測FOXA1在多株非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株mRNA表達(dá)情況。
　　2.提取非小細(xì)胞肺癌和癌旁正常肺組織RNA，通過RT-PCR研究FOXA1mRNA水平變化來確定它在肺癌及癌旁組織中的表達(dá)是否有差異。
　　3.提取非小細(xì)胞肺癌和癌旁正常肺組織蛋白，通過WesternBlot研究F

4、OXA1蛋白水平變化來確定它在肺癌及癌旁組織中的表達(dá)是否有臨床差異。
　　4.用免疫組化比較非小細(xì)胞肺癌原發(fā)灶和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶組織中FOXA1的表達(dá)差異。
　　5.用免疫組化比較I期病人肺癌組織與IV期病人原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶組織中FOXA1表達(dá)差異。
　　6.統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS19.0以及GraphPadPrism6Demo軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，定量資料組間比較采用t檢驗分析，定性資料組間二分類比

5、較采用χ2檢驗，IHC評分采用秩和檢驗。檢驗水準(zhǔn)P=0.05。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　【研究結(jié)果】
　　1.RT-PCR檢驗FOXA1在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)情況：
　　RT-PCR檢測FOXA1在肺癌細(xì)胞株95C、95D、A549、H460、H1975及PC9中的表達(dá)水平，結(jié)果顯示，F(xiàn)OXA1在H460細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著高于在其他細(xì)胞中的表達(dá)水平，在95C細(xì)胞中的表達(dá)水平最低。H460細(xì)胞FOXA

6、1的平均表達(dá)水平是95C細(xì)胞的109倍。
　　2.FOXA1在非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況：
　　我們用RT-PCR實驗檢測43例非小細(xì)胞肺癌組織及癌旁正常組織中的FOXA1mRNA表達(dá)情況。經(jīng)過統(tǒng)計分析，描繪散點圖發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXA1mRNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平為0.7311±0.09526，在癌旁組織表達(dá)水平為0.4856±0.05568，兩者表達(dá)水平存在差異（P<0.05）。分層統(tǒng)計分析這43例組織

7、FOXA1表達(dá)情況，結(jié)果顯示，這43例中，F(xiàn)OXA1mRNA在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)水平與年齡有一定相關(guān)性，在年齡小于等于55歲患者的非小細(xì)胞肺癌組織中明顯高于癌旁組織（P<0.05）。FOXA1與非小細(xì)胞肺癌的病理類型（腺癌及鱗癌）（P=0.362）、性別（P=0.331）、吸煙史（P=0.639）、家族史（P=0.641）、腫瘤大小（P=0.571）、分化程度（P=0.531）及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.904）無明顯相關(guān)。
　　

8、Westernblot結(jié)果顯示，在其中40例非小細(xì)胞肺癌中癌組織與癌旁組織的蛋白（其中有3例組織未能提取到滿意的蛋白）表達(dá)無明顯差異。我們對這40例肺非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行分層統(tǒng)計，結(jié)果顯示，F(xiàn)OXA1與肺癌的病理類型（腺癌及鱗癌）（P=0.533）、性別（P=0.592）、年齡（P=0.199）、吸煙史（P=0.5）、家族史（P=0.204）、腫瘤大?。≒=0.273）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.649）及分化程度（P=0.192）無明顯相關(guān)。<

9、br>　　3.IHC檢測FOXA1在非小細(xì)胞肺癌患者肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶腫瘤組織中表達(dá)情況：
　　IHC結(jié)果顯示，F(xiàn)OXA1主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)及胞膜無明顯表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)在12例非小細(xì)胞肺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶組織中FOXA1的表達(dá)水平有差異，在轉(zhuǎn)移灶中高于原發(fā)灶，但P值未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意義。
　　在40例I期NSCLCI期和12例IV期患者肺癌組織中IV期肺癌患者中肺癌組織表達(dá)有較I期升高的趨勢，P=0.176，未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)意