卵磷脂改性聚(3-羥基丁酸酯-3-羥基己酸酯)骨支架材料的制備及細胞相容性的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、組織工程學(xué)研究的主要問題是支架材料、種子細胞、生長因子和組織構(gòu)建,也稱為組織工程的四要素,應(yīng)用于骨組織工程的支架材料目前還處于廣泛的篩選及試驗階段。PHBHHx是繼PHB、PHBV后的第三代聚羥基烷酸酯(PHA),首先由清華大學(xué)的陳國強等人發(fā)明。因為PHBHHx具有一般合成塑料的熱加工性、良好的生物相容性、生物可降解性、能降解產(chǎn)物無毒性、光學(xué)活性、壓電性和耐紫外線輻射等性質(zhì),因而在生物醫(yī)用材料領(lǐng)域發(fā)揮了極大的作用,已經(jīng)成為近年來生物材料

2、領(lǐng)域最為活躍的研究熱點。但它最大的缺點是親水性差,較難滿足細胞在其上黏附生長的要求,所以用于組織工程的PHBHHx一般都要經(jīng)過親水改性。本研究以聚羥基脂肪酸酯家族中的新成員PHBHHx為基礎(chǔ),選擇高親水性材料PC與之共混的方法來改善PHBHHx在組織工程中應(yīng)用的局限性。 目的:1、研究PHBHHx、PHBHHx/PC的制備及其性能表征。 2、建立體外評價系統(tǒng),研究PHBHHx、PHBHHx/PC的細胞相容性。 方

3、法:1、PHBHHx/PC的制備及其性能表征:以PHBHHx和卵磷脂為原料制備PHBHHx/PC即,卵磷脂改性聚(3-羥基丁酸酯—3-羥基己酸酯)膜,通過衰減全反射(ATR)—傅立葉變換紅外光譜(FTIR)和X—射線光電子能譜法(XPS)檢測表面化學(xué)變化,示差掃描量熱法(DSC)進行示差掃描量熱分析、掃描電子顯微鏡分析(SEM)材料的結(jié)構(gòu)和表面形貌、測定材料的吸水率、接觸角測試儀測定接觸角,計算表面能,研究其性能表征是否適用于組織工程。

4、 2、材料的細胞相容性研究:通過不同PC含量的PHBHHx/PC和骨髓間充值干細胞復(fù)合培養(yǎng),用細胞計數(shù)法檢測細胞粘附率,倒置相差顯微鏡和掃描電子顯微鏡分析(SEM)觀察細胞的粘附與生長狀態(tài),MTT法檢測細胞的吸光度(OD值)來檢測材料對細胞的毒性并繪制生長曲線,流式細胞儀(FCM)分析細胞周期變化及倍體水平。比較PHBHHx/4%PC材料、PHBHHx/8%PC材料、PHBHHx/12%PC材料和純聚PHBHHx材料的細胞相容性

5、。 結(jié)果:1、PHBHHx/PC的制備及其性能表征:以PHBHHx和卵磷脂為原料制備PHBHHx/PC材料,示差掃描量熱分析表明PC和PHBHHx共混溶劑揮發(fā)膜有一定的物理相容性,和PHBHHx相比,PHBHHx/4%PC材料和PHBHHx/8%PC材料的結(jié)晶度變小,PHBHHx/12%PC材料的結(jié)晶度升高,結(jié)晶度變小提示材料的細胞親和性變好,因此,可推測,結(jié)晶度最小的PHBHHx/4%PC材料可能具有最好的細胞相容性。SEM顯

6、示PC的摻入導(dǎo)致材料表面粗糙度增加,并出現(xiàn)孔隙。隨著PC含量的增加材料的吸水率也升高。接觸角測試結(jié)果顯示共混物的表面自由能明顯高于純PHBHHx材料的表面能,并且隨著PC含量的增加表面能升高,增加了材料的親水性。 2、材料的細胞相容性研究:通過不同PC含量的PHBHHx/PC和骨髓間充值干細胞復(fù)合培養(yǎng),細胞計數(shù)法和MTT法檢測表明PHBHHx/4%PC材料具有更好的粘附率和增值率,MTT法和流式細胞儀分析結(jié)果表明各組材料的細胞毒

7、性均為1級,毒性較弱,能夠較為安全的應(yīng)用于臨床。用倒置顯微鏡和掃描電鏡等動態(tài)觀察,PHBHHx/4%PC材料組細胞幾乎覆蓋整個材料表面,細胞生長狀態(tài)良好,細胞伸出扁狀偽足相互連接或粘附在材料表面,且有大量細胞外基質(zhì)分泌,具有很高的活力,優(yōu)于PHBHHx組、PHBHHx/8%PC材料組和PHBHHx/12%PC材料上的細胞。流式細胞儀檢測結(jié)果表明處理后的PHBHHx表面對骨髓間充質(zhì)干細胞的細胞周期產(chǎn)生影響,和純聚PHBHHx相比,PHBH

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