蘋果DELLA相關(guān)基因的克隆及功能初步鑒定.pdf

1、柱型蘋果作為蘋果生產(chǎn)中的豐產(chǎn)樹(shù)型之一，是蘋果高度密植栽培的理想品種。決定柱型蘋果遺傳特性的柱型基因Co與調(diào)控樹(shù)型發(fā)育的重要內(nèi)源激素——赤霉素(GA)之間的關(guān)系是蘋果柱型突變分子機(jī)制研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。 本試驗(yàn)以柱型蘋果“威賽克”及非柱型蘋果“旭”為試材，利用蘋果DELLA相關(guān)基因的序列信息設(shè)計(jì)了特異引物，通過(guò)PCR擴(kuò)增克隆目的基因。將目的基因插入至pCAMBIA1305．1植物表達(dá)載體中，農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化本生煙，并

2、通過(guò)PCR、RT-PCR以及GUS染色法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株；將目的基因插入至GFP瞬時(shí)表達(dá)載體pEZ-NL，中，通過(guò)基因槍法，轉(zhuǎn)入洋蔥表皮細(xì)胞，在激光共聚焦顯微鏡下觀察目的基因蛋白的亞細(xì)胞定位。試驗(yàn)結(jié)果如下： 1．從蘋果“威賽克”和“旭”中克隆了2個(gè)與DELLA相關(guān)的基因——MdRGL1a、MdRGL2a，長(zhǎng)度分別為1920bp、1743bp。經(jīng)DNAMAN軟件分析，威賽克、旭的MdRGL1a，威賽克、旭的MdRGL2a核苷酸序列同

3、源性為100％;所推測(cè)的氨基酸序列均含有．DEllA蛋白家族所特有的結(jié)構(gòu)區(qū)域。初步表明這兩個(gè)基因在蘋果不同品種間高度同源，與蘋果威賽克的柱型突變無(wú)關(guān)。 2．構(gòu)建了植物表達(dá)載體pRGL1a-GUS、pRGL2a-GUS，MdRGL1a、MdRGL2a轉(zhuǎn)基因植株分別經(jīng)潮霉素篩選，以及PCR、RT-PCR檢測(cè)、GUS染色驗(yàn)證．MdRGL1a、MdRGL2a基因成功轉(zhuǎn)入煙草植株中。 3．構(gòu)建得到GFP瞬時(shí)表達(dá)載體pRGL1a-G