蘋果MdFT基因克隆及功能的初步鑒定.pdf

1、果樹花芽形成是產(chǎn)量形成的基礎(chǔ)，而大多數(shù)果樹在第一次開花結(jié)果之前常常需要經(jīng)歷一個漫長的營養(yǎng)生長期——童期。童期的存在嚴重阻礙了雜交育種的進程，延長了育種周期?；蚬こ碳夹g(shù)的發(fā)展為解決這一難題提供了新途徑。最近，F(xiàn)T蛋白已被證明是植物中的“成花素”，蘋果MdFT基因是擬南芥AtFT基因的同源基因，本研究開展了該基因的克隆和功能鑒定工作，取得的結(jié)果有： 1、通過RT-PCR擴增，從蘋果栽培品種‘嘎拉’葉片cDNA中克隆了MdFT基因，

2、同時，從擬南芥生態(tài)型Columbia中克隆了AtFT基因作為對照。序列分析表明，在氨基酸水平上，MdFT與AtFT的同源性為72．6%。 2、聚類分析表明，推導的MdFT蛋白與來自擬南芥、水稻、柑桔、楊樹等的FT同源基因推導的蛋白同歸于FT類。 3、構(gòu)建了植物表達載體35S：：MdFT和35S：：AtFT。利用根癌農(nóng)桿菌介導法，將它們導入擬南芥生態(tài)型Columbia和番茄栽培品種‘中蔬一號’中，得到了抗卡那霉素的陽性轉(zhuǎn)化

3、植株。經(jīng)PCR擴增檢測，證明它們已經(jīng)導入轉(zhuǎn)化的擬南芥基因組；經(jīng)PCR擴增和半定量RT-PCR檢測，證明它們已經(jīng)導入轉(zhuǎn)化的番茄基因組，并在轉(zhuǎn)錄水平得到了表達。 4、轉(zhuǎn)基因擬南芥的Quantitative RT-PCR檢測表明，MdFT基因通過調(diào)節(jié)下游成花相關(guān)基因的表達誘導擬南芥產(chǎn)生早花現(xiàn)象。 5、亞細胞定位結(jié)果顯示，MdFT-GFP蛋白主要定位在細胞膜上。 6、形態(tài)鑒定結(jié)果表明，無論是轉(zhuǎn)基因擬南芥植株還是番茄植株，