染料作探針光譜法研究血清蛋白與藥物小分子間的相互作用.pdf

1、本文主要研究了3種染料與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用，并分別用這些染料作探針研究了幾種藥物與BSA的特異性結(jié)合反應(yīng)。共有以下五部分：
　　第一章：對(duì)藥物小分子與蛋白質(zhì)分子間相互作用的研究方法、研究?jī)?nèi)容進(jìn)行了綜合論述，并且介紹了熒光探針的種類及發(fā)展前景，共引用文獻(xiàn)106篇。
　　第二章：用曙紅Y(EY)作為熒光探針，利用熒光光譜法和紫外可見(jiàn)吸收光譜法分別研究了硫酸卡那霉素(KM)、硫酸鏈霉素(SM)與BSA的結(jié)合反應(yīng)。結(jié)果

2、表明在pH=7.40的Tris-HCl緩沖溶液中，EY與BSA作用使BSA熒光猝滅，其猝滅機(jī)理屬于靜態(tài)猝滅，并得到了不同溫度下EY與BSA間的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、結(jié)合距離及作用力類型。利用BSA-EY體系中加入KM、SM后，BSA熒光強(qiáng)度的恢復(fù)。證明了KM、SM與BSA發(fā)生了特異性結(jié)合反應(yīng)，確定了KM、SM在BSA上的鍵合位點(diǎn)為ⅡA亞區(qū)的siteⅠ。
　　第三章：借助熒光探針吖啶黃(ACF)(或甲基綠(MG))，研究了與蛋白反應(yīng)

3、蛋白熒光變化不明顯的硫酸鏈霉素(SM)、硫酸卡那霉素(KM)、慶大霉素(GM)、丁胺卡那霉素(AM)、新霉素(NM)、甲砜霉素(TN)、氟苯尼考(FN)七種藥物與BSA的相互作用。研究表明在pH=7.40的Tris-HCl緩沖溶液中，ACF使BSA熒光猝滅，其猝滅機(jī)理屬于靜態(tài)猝滅，并得到了不同溫度下ACF(或MG)與BSA間的結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位點(diǎn)數(shù)及作用力類型等。之后把這7種藥物分別加入到BSA-ACF(或BSA-MG)體系中后，使BSA

4、的熒光強(qiáng)度有所恢復(fù)，這表明ACF(或MG)、藥物與BSA間發(fā)生了競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合反應(yīng)，且得到藥物與ACF-BSA的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)能力是GM> TN> NM> FN> KM> SM> AM；藥物與MG-BSA的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)能力是NM> AM> GM> SM> FN> KM> TN。證實(shí)了用ACF(或MG)作熒光探針，利用熒光光譜法研究，可以知道這7種藥物與BSA間發(fā)生了特異性結(jié)合反應(yīng)，并利用具有特異性結(jié)合的標(biāo)記藥物確定了這7種藥物在BSA上的鍵合位點(diǎn)為ⅡA

5、亞區(qū)的siteⅠ。
　　第四章：在pH=7.40的Tris-HCl緩沖溶液中，利用熒光猝滅法、同步熒光法，分別研究了293K、303K和310K溫度下ACF、MG與BSA之間的反應(yīng)機(jī)理。結(jié)果表明：ACF、MG與BSA之間猝滅為靜態(tài)猝滅；且染料與BSA間主要通過(guò)靜電作用力結(jié)合，結(jié)合常數(shù)均大于104，結(jié)合位點(diǎn)主要位于BSA的疏水亞結(jié)構(gòu)域ⅡA，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)為1。
　　第五章將同步熒光法與熒光猝滅法所得數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，兩種方法所得的結(jié)果

6、基本一致，表明同步熒光法也可以用于染料與蛋白反應(yīng)機(jī)理的研究。
　　第六章：在Tris-HCl緩沖溶液(pH=7.40)中，分別研究了莫西沙星(MXFX)、諾氟沙星(NFLX)、氧氟沙星(OFLX)、恩諾沙星(EFLX)、洛美沙星(LMX)、環(huán)丙沙星(CPLX)與BSA的相互作用，利用計(jì)算藥物小分子與蛋白結(jié)合常數(shù)的常用方程Scatchard修正方程、Lineweaver-Burk雙倒數(shù)方程、雙對(duì)數(shù)方程、修正的Stern-Volmer