自由基在哺乳動物體內(nèi)的分布規(guī)律的研究.pdf

1、在前期的工作中，為研究自由基在活體動物體內(nèi)的分布，我們將DCFH-DA靜脈注射到SD大鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)自由基有規(guī)律地集中分布于腹白線等結(jié)締組織中。本研究首先使用DCFH-DA與mito-SOXTM Red兩種極為常用的熒光探針靜脈注射入新西蘭兔和食蟹猴體內(nèi)，觀察其自由基分布規(guī)律，進一步證實了上述發(fā)現(xiàn);進而通過構(gòu)建可在線粒體內(nèi)表達能標記超氧陰離子的環(huán)狀排列的黃色熒光蛋白（circularly permuted yellow fluoresce

2、nt protein，cpYFP）的轉(zhuǎn)基因動物模型——C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)來證實自由基的規(guī)律性分布，并研究線粒體與自由基的相關(guān)性和傳導方式。
　　現(xiàn)將主要的研究結(jié)果報告如下:
　　1.對新西蘭兔和食蟹猴靜脈注射熒光染料DCFH-DA和mito-SOXTM Red后，發(fā)現(xiàn)自由基在其體內(nèi)主要沿結(jié)締組織分布;同時，在體視顯微鏡下觀察結(jié)締組織，發(fā)現(xiàn)其結(jié)締組織中的膠原蛋白有強烈的熒光現(xiàn)象，即自由基在結(jié)締組織中

3、沿膠原蛋白纖維傳導;
　　2.通過構(gòu)建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)轉(zhuǎn)基因小鼠模型，發(fā)現(xiàn)在發(fā)育期間超氧陰離子自由基主要沿其腹白線呈線性分布，并隨日齡的增加逐漸向上延伸;同時，其熒光強度在每天的11:30-13:30間達到峰值;
　　3.流經(jīng)腹白線之電流導致膠原蛋白纖維顯色。在以金屬導線模擬代替腹白線后，野生型C57BL/6小鼠的腹白線電流在接通電路的瞬間即達到0.7μA，而轉(zhuǎn)基因小鼠則是在約70分鐘后才出現(xiàn)0