17β-雌二醇預防早產兒視網膜病變的實驗研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：早產兒視網膜病變大鼠模型的建立 目的:建立符合早產兒視網膜病變(ROP)病理特點的大鼠模型。 方法：選擇 7日齡新生 Sprague Dawley（SD）大鼠24 只，隨機分為正常組和單純高氧組，將單純高氧組的12只鼠置于氧濃度75％的容器內連續(xù)飼養(yǎng)5天，再置于正?？諝猸h(huán)境中飼養(yǎng)至17日齡；正常組的12 只鼠在正?？諝猸h(huán)境下飼養(yǎng)至17日齡。通過以下方法觀察兩組視網膜血管改變：視網膜切

2、片常規(guī)HE 染色，計數(shù)突破視網膜內界膜的新生血管內皮細胞核數(shù)；視網膜鋪片經ADP酶染色，了解視網膜血管形態(tài)的改變。 結果：P17時正常組新生鼠突破內界膜的血管內皮細胞核數(shù)達0.91±0.79個，單純高氧組22.00±2.98個，差異有顯著性意義；視網膜鋪片顯示單純高氧組視網膜喪失正常的兩層血管網結構，血管分布紊亂，可見大片無灌注區(qū)，無灌注區(qū)邊緣見新生血管芽；正常組同齡小鼠示視盤周圍放射狀分布的視網膜血管主干較粗，毛細血管網發(fā)育良

3、好，無明顯無灌注區(qū)及新生血管芽。 結論：該視網膜病動物模型與早產兒視網膜病變相似，制備過程簡便，可重復性高，并可進行定量研究，故該模型是研究早產兒視網膜病變較為理想的模型。 第二部分：雌二醇對ROP大鼠模型中視網膜新生血管的作用 目的：進行雌二醇抑制ROP新生血管的實驗研究，并探討其機制。 方法：選擇7日齡新生SD 大鼠88 只，共分為4組,每組22 只。組1為正常組，組2為單純高氧組：將7日齡大鼠置于密

4、閉容器內，調節(jié)氧氣流量，使容器內氧濃度保持在75％，飼養(yǎng)5 d至小鼠12 d齡，然后置于正?？諝猸h(huán)境下飼養(yǎng)至17 d齡。組3為雌二醇干預組：飼養(yǎng)同組2，但在小鼠7日齡起行皮下注射17β-雌二醇(E2，溶媒稀釋，配制濃度為分別為2g/L)，體積為0.5μL，一次/d至小鼠17 d齡。組7為溶媒干預組，飼養(yǎng)及給藥方法同雌二醇干預組，注射溶劑改為相同體積的溶媒。通過HE染色、視網膜鋪片觀測血管改變和增生情況，免疫組化及RT-PCR檢測VEGF

5、、MMP-2在分子及mRNA 水平的表達。 結果：突破內界膜的內皮細胞數(shù)四組比較差異有統(tǒng)計學意義，單純高氧組新生血管較多，有的形成血管索，內皮細胞數(shù)較正常組明顯增多，雌二醇干預組內皮細胞數(shù)較單純高氧組及溶媒干預組明顯減少；視網膜鋪片可見雌二醇干預組較之單純高氧組血管網有不同程度的改善，血管結構清晰，形態(tài)基本正常；免疫組織化學染色顯示雌二醇干預組 VEGF、MMP-2 表達量較之單純高氧組及溶媒干預組明顯減少；RT-PCR 結果顯

6、示: 雌二醇干預組與單純單純高氧組及溶媒干預組之間VEGF mRNA和MMP-2 mRNA 表達的差異具有統(tǒng)計學意義。 結論：17β-雌二醇可在一定程度上抑制ROP新生血管的產生，機制可能是抑制了VEGF及MMPs-2的水平有關。 第三部分：17β-雌二醇對高氧誘導的大鼠視網膜細胞凋亡的保護作用 目的: 觀察17β-雌二醇對于ROP大鼠模型中視網膜神經節(jié)細胞層的細胞凋亡的影響，并初步探討其機制。 方法: 7

7、 d齡SD新生大鼠48只隨機分為4組，每組12只，分為正常對照組、單純高氧組、雌二醇干預組及溶媒干預組，單純高氧組置于氧濃度75％的容器內飼養(yǎng)5 d，再置正?？諝庀嘛曫B(yǎng)至17 d齡，雌二醇干預組飼養(yǎng)方法同單純高氧組，在大鼠7～17d齡間每日皮下注射17β-雌二醇（E2，溶媒稀釋，配制濃度為2g/L）0.5μL/d，溶媒干預組飼養(yǎng)方法同雌二醇干預組，藥物改為相同體積溶媒。眼球切片并行TUNEL染色和HE染色，觀察4組RGCL層細胞的形態(tài)，