17β-雌二醇預(yù)防早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變的實驗研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變大鼠模型的建立 目的:建立符合早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP)病理特點的大鼠模型。 方法：選擇 7日齡新生 Sprague Dawley（SD）大鼠24 只，隨機(jī)分為正常組和單純高氧組，將單純高氧組的12只鼠置于氧濃度75％的容器內(nèi)連續(xù)飼養(yǎng)5天，再置于正?？諝猸h(huán)境中飼養(yǎng)至17日齡；正常組的12 只鼠在正常空氣環(huán)境下飼養(yǎng)至17日齡。通過以下方法觀察兩組視網(wǎng)膜血管改變：視網(wǎng)膜切

2、片常規(guī)HE 染色，計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)；視網(wǎng)膜鋪片經(jīng)ADP酶染色，了解視網(wǎng)膜血管形態(tài)的改變。 結(jié)果：P17時正常組新生鼠突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)達(dá)0.91±0.79個，單純高氧組22.00±2.98個，差異有顯著性意義；視網(wǎng)膜鋪片顯示單純高氧組視網(wǎng)膜喪失正常的兩層血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)，血管分布紊亂，可見大片無灌注區(qū)，無灌注區(qū)邊緣見新生血管芽；正常組同齡小鼠示視盤周圍放射狀分布的視網(wǎng)膜血管主干較粗，毛細(xì)血管網(wǎng)發(fā)育良

3、好，無明顯無灌注區(qū)及新生血管芽。 結(jié)論：該視網(wǎng)膜病動物模型與早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變相似，制備過程簡便，可重復(fù)性高，并可進(jìn)行定量研究，故該模型是研究早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變較為理想的模型。 第二部分：雌二醇對ROP大鼠模型中視網(wǎng)膜新生血管的作用 目的：進(jìn)行雌二醇抑制ROP新生血管的實驗研究，并探討其機(jī)制。 方法：選擇7日齡新生SD 大鼠88 只，共分為4組,每組22 只。組1為正常組，組2為單純高氧組：將7日齡大鼠置于密

4、閉容器內(nèi)，調(diào)節(jié)氧氣流量，使容器內(nèi)氧濃度保持在75％，飼養(yǎng)5 d至小鼠12 d齡，然后置于正常空氣環(huán)境下飼養(yǎng)至17 d齡。組3為雌二醇干預(yù)組：飼養(yǎng)同組2，但在小鼠7日齡起行皮下注射17β-雌二醇(E2，溶媒稀釋，配制濃度為分別為2g/L)，體積為0.5μL，一次/d至小鼠17 d齡。組7為溶媒干預(yù)組，飼養(yǎng)及給藥方法同雌二醇干預(yù)組，注射溶劑改為相同體積的溶媒。通過HE染色、視網(wǎng)膜鋪片觀測血管改變和增生情況，免疫組化及RT-PCR檢測VEGF

5、、MMP-2在分子及mRNA 水平的表達(dá)。 結(jié)果：突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)四組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，單純高氧組新生血管較多，有的形成血管索，內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較正常組明顯增多，雌二醇干預(yù)組內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)較單純高氧組及溶媒干預(yù)組明顯減少；視網(wǎng)膜鋪片可見雌二醇干預(yù)組較之單純高氧組血管網(wǎng)有不同程度的改善，血管結(jié)構(gòu)清晰，形態(tài)基本正常；免疫組織化學(xué)染色顯示雌二醇干預(yù)組 VEGF、MMP-2 表達(dá)量較之單純高氧組及溶媒干預(yù)組明顯減少；RT-PCR 結(jié)果顯

6、示: 雌二醇干預(yù)組與單純單純高氧組及溶媒干預(yù)組之間VEGF mRNA和MMP-2 mRNA 表達(dá)的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：17β-雌二醇可在一定程度上抑制ROP新生血管的產(chǎn)生，機(jī)制可能是抑制了VEGF及MMPs-2的水平有關(guān)。 第三部分：17β-雌二醇對高氧誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用 目的: 觀察17β-雌二醇對于ROP大鼠模型中視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層的細(xì)胞凋亡的影響，并初步探討其機(jī)制。 方法: 7

7、 d齡SD新生大鼠48只隨機(jī)分為4組，每組12只，分為正常對照組、單純高氧組、雌二醇干預(yù)組及溶媒干預(yù)組，單純高氧組置于氧濃度75％的容器內(nèi)飼養(yǎng)5 d，再置正?？諝庀嘛曫B(yǎng)至17 d齡，雌二醇干預(yù)組飼養(yǎng)方法同單純高氧組，在大鼠7～17d齡間每日皮下注射17β-雌二醇（E2，溶媒稀釋，配制濃度為2g/L）0.5μL/d，溶媒干預(yù)組飼養(yǎng)方法同雌二醇干預(yù)組，藥物改為相同體積溶媒。眼球切片并行TUNEL染色和HE染色，觀察4組RGCL層細(xì)胞的形態(tài)，