腦缺血治療藥物對細胞黏附分子表達的影響.pdf

1、目的：以大鼠急性腦缺血再灌注損傷為動物模型，觀察燈盞花素和步長腦心通對細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)的影響。在此基礎上，利用基因芯片探討燈盞花素、白藜蘆醇苷、尼莫地平及DANC對細胞黏附分子(CAMs)基因表達的調節(jié)。體外培養(yǎng)腦微血管內皮細胞和人臍靜脈內皮細胞，研究燈盞花素和白藜蘆醇苷以及銀杏提取物對炎癥因子白介素-1β(IL-1β)或脂多糖(LPS)誘導的ICAM-1、VCAM-1、E-選擇素

2、(E-selectin)和P-選擇素(P-selectin)表達的影響。 方法：(1)燈盞花素(12mg/kg)，腦心通(480mg/kg)，尼莫地平(12mg/kg)，白藜蘆醇苷(200mg/kg)及DANC(187.5mg/kg)連續(xù)灌胃7天，采用LongaEZ線栓法建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，再灌注24h后取出腦組織，一部分行免疫組化觀察燈盞花素和腦心通對大鼠缺血再灌注后腦組織ICAM-1和VCAM-1的影響。制備腦組

3、織勻漿抽提RNA，進行逆轉錄和芯片雜交，獲得不同藥物處理組與模型對照組CAMs相關基因表達水平的差異，評價以上五種藥物對大鼠缺血性腦損傷后CAMs基因表達的調節(jié)作用。(2)分離培養(yǎng)腦微血管內皮細胞和人臍靜脈內皮細胞，運用Ⅷ因子相關抗原免疫細胞化學對細胞進行鑒定。內皮細胞經IL-1β或LPS誘導之后，MTT法觀察不同的藥物處理對細胞增殖的影響，細胞表面黏附分子抗原檢測采用ELISA及流式細胞術。 結果：(1)免疫組化的結果表明，缺

4、血再灌注損傷后梗死區(qū)血管內皮細胞大量表達ICAM-1和VCAM-1，而燈盞花素明顯下調二者的表達，腦心通對ICAM-1的抑制作用較其對VCAM-1的作用強。芯片雜交的數據顯示，模型與空白對照兩組比較，得到5個在模型組中明顯上調的基因，分別是ICAM-1、VLA-4、VCAM-1，CD44和L-selectin，表明這5個基因與缺血再灌注后的腦損傷有關。對于不同藥物預處理的大鼠腦組織，對CAMs基因表達改變各有不同。燈盞花素在下調ICAM

5、-1，VLA-4，PECAM-1，L-selectin及VCAM-1的同時，對神經細胞黏附分子(NCAM)的表達有上調作用。而尼莫地平在燈盞花素的基礎之上還下調了P-selectin。DANC、白藜蘆醇苷口服及靜脈注射主要影響L-selectin，P-selectin及VCAM-1。(2)結合內皮細胞在倒置顯微鏡下的形態(tài)學特征及Ⅷ因子相關抗原鑒定結果，確認分離培養(yǎng)的為血管內皮細胞。靜息的內皮細胞表面只表達少量的ICAM-1和VCAM-1

6、，而不表達E-selectin和P-selectin。經炎癥因子IL-1β或LPS刺激之后，表達明顯增強，其中以ICAM-1的上調最為明顯。燈盞花素注射液不同程度的抑制了ICAM-1，VCAM-1及E-selectin的表達，其中以50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml的濃度呈濃度依賴趨勢。60μM的白藜蘆醇苷對ICAM-1和VCAM-1有抑制作用，但對E-selectin和P-selectin的影響沒有顯著性差異。燈盞花素和

7、白藜蘆醇苷對體外誘導的CAMs均有不同程度的抑制作用，但并不影響細胞的增殖。此外，不同濃度的銀杏提取物(GBE)對IL-1β誘導的腦微血管內皮細胞表達E-selectin均有抑制作用。 結論：CAMs的表達與缺血性腦損傷密切相關，燈盞花素和腦心通對缺血性腦損傷的改善和保護作用可能與下調CAMs有關。缺血性腦損傷后CAMs的基因表達也有影響，燈盞花素、白藜蘆醇苷、DANC、尼莫地平對CAMs的基因表達均有不同程度的調節(jié)，但作用的靶