同型半胱氨酸與上皮生長因子受體間接激活途徑相關(guān)性的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文同型半胱氨酸與上皮生長因子受體間接激活途徑相關(guān)性的研究姓名：楊軍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師：張朝東20060901中文論著摘要同型半胱氨酸誘導(dǎo)的ERE調(diào)節(jié)作用與上皮生長因子受體的間接激活目的高同型半胱氨酸血癥與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病有關(guān)，同型半胱氨酸(Hcy)在腦內(nèi)積聚，成為潛在的神經(jīng)毒素。然而，Hcy水平的升高對神經(jīng)細胞影響的機制目前尚不清楚。在本實驗中，我們通過對小鼠原代小腦顆粒神經(jīng)元細胞體外培養(yǎng)，并

2、加入Hcy等藥物干預(yù)，來研究Hcy與神經(jīng)細胞上皮生長因子受體間接激活信號傳導(dǎo)途徑之間的關(guān)系。方法選取出生7天CD—l小鼠，進行小腦顆粒神經(jīng)元原代培養(yǎng)，無菌操作，取出小腦，去除腦膜，切碎，在不含鈣鎂的胰蛋白酶中消化3分鐘，1500r／min離心7分鐘，移入到細胞培養(yǎng)液，培養(yǎng)液成分為Dulbecco’s培養(yǎng)基(DMEM)，用200目篩網(wǎng)過濾，種植到多聚賴氨酸處理的培養(yǎng)皿中，放入37“C、5％C02培養(yǎng)箱貼壁15分鐘。然后換含10％馬血清的細

3、胞培養(yǎng)液。24小時后，加入40州阿糖胞苷。置37℃5％C02溫箱每日觀察。培養(yǎng)7天神經(jīng)元細胞，隨機分四組：生理鹽水對照組、AGl478對照組、Hcy處理組、AGl478和Hcy處理組。換成無血清培養(yǎng)液后，加入Hcy，20分鐘。對于AGl478和Hcy處理組，先加入AGl478(1洲)，15min，再加入Hcy(100刪)，20分鐘。每35mm皿加100gL蛋白提取液，收集細胞，進行免疫印已檢測。用流式細胞儀分析細胞凋亡率時，培養(yǎng)7天神經(jīng)