MMP-2、MMP-9和TIMP-1在子宮腺肌病子宮內(nèi)膜-肌層界面的表達及意義.pdf

1、目的：探討子宮腺肌病患者在位子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜．肌層界面(endometrial-myometrial interface，以下簡稱EMI)處基質(zhì)金屬蛋白酶．2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶．9(MMP-9)及基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1(TIMP-1)的表達及其生物學(xué)意義。 方法：收集因子宮腺肌病行子宮切除的40例子宮內(nèi)膜(含部分肌層)作為研究組，因子宮肌瘤(無子宮內(nèi)膜病變)行子宮切除的40例子宮內(nèi)膜(含部分肌層)的標(biāo)本作為

2、對照組。對于兩種疾病同時存在者不納入研究，患者術(shù)前半年內(nèi)均未用過甾體激素類藥物。標(biāo)本經(jīng)常規(guī)10％福爾馬林液固定，石蠟包埋，制成蠟塊，行HE染色，經(jīng)鏡下觀察每種疾病的子宮內(nèi)膜是正常的。所有蠟塊行5μm連續(xù)切片。裝片后脫蠟至水，切片經(jīng)高壓抗原熱修復(fù)后，采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白．過氧化物酶連接法(SP三步法)分別進行染色，進行免疫組化染色前，先進行預(yù)實驗，確定各抗體的最佳稀釋度(三種抗體均為1：80)、最佳孵育溫度和時間。顯微鏡下觀察各

3、組切片中EMI(包括基底層和肌層連接帶)內(nèi)膜腺體和遠(yuǎn)離肌層的功能層(以下簡稱遠(yuǎn)肌層)內(nèi)膜腺體中MMP-2、MMP-9及TIMP-1的表達，陽性染色為細(xì)胞漿中出現(xiàn)淺黃色、棕黃色或棕褐色顆粒，根據(jù)陽性細(xì)胞百分率及顯色深淺，將結(jié)果分為陰性(一)、弱陽性(+)、中度陽性(++)、強陽性(+++)。分別記錄MMP-2、MMP-9及TIMP-1的染色強度，比較各因子在EMI處(基底層和肌層連接帶)的腺體和遠(yuǎn)肌層腺體的表達有無差異。同時觀察比較兩組E

4、MI肌層中腺體的數(shù)量：每張片子隨機觀察不同的四個低倍鏡視野的最寬處，記錄EMI肌層中腺體的數(shù)量，取其平均值，進一步比較同一期別研究組與對照組有無差異。應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行x<'2>檢驗，艙驗。P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1．EMI顯示子宮內(nèi)膜腺體和間質(zhì)直接與子宮肌層相連，二者之間缺乏粘膜下層。在對照組中，EMI多為平滑的或呈鋸齒狀結(jié)構(gòu)，在腺肌病組中，EMI多表現(xiàn)非常不規(guī)則形狀。腺肌病組EMI肌層內(nèi)

5、腺體的數(shù)量明顯大于對照組，兩者比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。 2．MMP-2、MMP-9和TIMP-1三種蛋白的陽性表達產(chǎn)物均定位于子宮內(nèi)膜腺上皮的細(xì)胞漿，少量表達于間質(zhì)細(xì)胞胞漿，呈淡黃色、棕黃色、棕褐色等不同強度染色，MMP-2和MMP-9呈現(xiàn)相似的表達強度。在子宮腺肌病組和對照組中，分泌期MMP-2、MMP-9的總體(EMI和遠(yuǎn)肌層之和)表達強度顯著高于增生期(P<0.05)。在兩組中TIMP-1的表達增生期與分泌

6、期比較差異無顯著性意義(P>0.05)。 3．腺肌病組增生期和分泌期MMP-2、MMP-9的表達強度EMI處顯著高于遠(yuǎn)肌層(P<0.05)。EMI處MMP-2、MMP-9的表達增生期與分泌期比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 4．對照組中增生期EMI處MMP-2、MMP-9的表達強度高于遠(yuǎn)肌層(P<0.05)，分泌期二者的表達在EMI略高于遠(yuǎn)肌層，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。MMP-2、MMP-9在增生期E

7、MI的表達與分泌期EMI的表達比較也無差異。 5．無論增生期還是分泌期，EMI處MMP-2、MMP-9表達，腺肌病組顯著高于對照組(P<0.05)。 6．EMI處TIMP-1在增生期和分泌期的表達，腺肌病組明顯低于對照組(P<0.05)。TIMP-1在EMI和遠(yuǎn)肌層的表達比較無顯著差異(P>0.05)。 7．EMI處MMP-2/TIMP-1與MMP-9/TIMP-1兩個比值，腺肌病組明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)

8、計學(xué)意義(P<0.05)。遠(yuǎn)肌層處MMP-2/TIMP-1與MMP-9/TIMP-1兩個比值，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論： 1．子宮腺肌病EMI表現(xiàn)為嚴(yán)重的不規(guī)則，EMI肌層中腺體多于對照組，可見多個生長性位點，推測該區(qū)域的結(jié)構(gòu)和功能改變可能與子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。 2．子宮腺肌病組EMI處的內(nèi)膜腺體中MMP-2、MMP-9的表達顯著高于對照組，而TIMP-1的表達顯著低于對照組，這種表達形式可

9、使子宮內(nèi)膜的侵蝕能力增強，降解包括基底膜在內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)，為腺肌病異位病灶的形成提供條件，可能參與子宮腺肌病的發(fā)生和發(fā)展。 3．分泌期MMP-2、MMP-9的總體表達強度顯著高于增生期，呈周期性變化，說明此蛋白水解酶在子宮內(nèi)膜轉(zhuǎn)化、內(nèi)膜崩潰和經(jīng)期出血等方面發(fā)揮作用，其分泌可能受雌、孕激素的影響。 4．MMP-2/TIMP-1與MMP-9/TIMP-1這兩個比值在腺肌病組EMI處平衡失調(diào)可能在子宮腺肌病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用