五肽化合物PLNPK肽對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用及機(jī)理研究.pdf

1、目的： 研究五肽化合物PLNPK肽對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)的治療作用，并初步探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1．建立大鼠從動(dòng)物模型；測(cè)量各組大鼠的踝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)，觀察PLNPK肽對(duì)AA大鼠原發(fā)性及繼發(fā)性踝關(guān)節(jié)腫脹的抑制作用；HE染色觀察PLNPK肽對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)病理改變的影響；Vimentin、CD68和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中成纖維樣滑膜細(xì)胞(

2、fibroblast-likesynoviocytes，F(xiàn)LS)的增殖、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和活化的影響。 2．應(yīng)用Ⅱ型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化方法培養(yǎng)AA大鼠關(guān)節(jié)FLS，建立體外AA大鼠原代關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞培養(yǎng)體系，用MTS法觀察PLNPK肽在體外對(duì)FLS增殖的影響。提取AA大鼠腹腔巨噬細(xì)胞(peritoneal macrophage，PEMψ)；PLNPK肽作用于PEMψ后，提取培養(yǎng)上清液，與AA大鼠FLS共同孵育，MTS方法觀察PLNPK

3、肽對(duì)AA大鼠FLS增殖的影響。 3．應(yīng)用MTS法觀察PLNPK肽體外對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7增殖的影響。應(yīng)用MTS法和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽體外對(duì)正常大鼠PEMψ增殖和活化的影響。應(yīng)用MTS法和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽體外對(duì)從大鼠PEMψ增殖和活化的影響。PLNPK肽作用于AA大鼠PEMψ后，提取培養(yǎng)上清液，應(yīng)用ELISA方法觀察PLNPK肽對(duì)巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子TNF-α和IL-1β含量的影響。

4、 結(jié)果： 1．給藥劑量為200μg/kg/d和100μg/kg/d時(shí)，PLNPK肽可以減輕AA大鼠致炎側(cè)及對(duì)側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 PLNPK肽能夠明顯改善AA大鼠關(guān)節(jié)的滑膜組織增生、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及血管翳形成，減輕骨和軟骨的損傷。PLNPK肽能夠抑制AA大鼠關(guān)節(jié)滑膜組織中FLS的過(guò)度增殖和巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，降低巨噬細(xì)胞的活化程度。 2．藥物濃度為0.4-3.2mg/

5、ml時(shí)，PLNPK肽對(duì)體外培養(yǎng)的FLS增殖無(wú)明顯的抑制作用，與陰性對(duì)照組比較，差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠間接抑制FLS的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢(shì)，與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑制率為17.89-35.49％。 3．藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢(shì)，與陰性對(duì)照組比較

6、，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑制率為21.24-81.68％。藥物濃度為1.6-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ的增殖，與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑制率為21.32-77.80％；藥物濃度為1.6-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠明顯減少體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ中CD86陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)。藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)從大鼠PE

7、Mψ的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢(shì)，與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，抑制率為36.41-82.85％；藥物濃度為0.4-3.2mg/ml時(shí)，PLNPK肽能夠明顯減少體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ中CD86陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)。PLNPK肽藥物濃度為0.2-3.2mg/ml和0.8-3.2mg/ml時(shí)，分別能夠抑制體外培養(yǎng)AA大鼠PEMψ分泌IL-1β和TNF-α,抑制作用有劑量依賴趨勢(shì)，與陰性對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0