五肽化合物PLNPK肽對佐劑性關節(jié)炎的治療作用及機理研究.pdf

1、目的： 研究五肽化合物PLNPK肽對佐劑性關節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)的治療作用，并初步探討其可能的作用機制。 方法： 1．建立大鼠從動物模型；測量各組大鼠的踝關節(jié)周長，觀察PLNPK肽對AA大鼠原發(fā)性及繼發(fā)性踝關節(jié)腫脹的抑制作用；HE染色觀察PLNPK肽對AA大鼠關節(jié)病理改變的影響；Vimentin、CD68和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽對AA大鼠關節(jié)滑膜組織中成纖維樣滑膜細胞(

2、fibroblast-likesynoviocytes，F(xiàn)LS)的增殖、巨噬細胞浸潤和活化的影響。 2．應用Ⅱ型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化方法培養(yǎng)AA大鼠關節(jié)FLS，建立體外AA大鼠原代關節(jié)滑膜細胞培養(yǎng)體系，用MTS法觀察PLNPK肽在體外對FLS增殖的影響。提取AA大鼠腹腔巨噬細胞(peritoneal macrophage，PEMψ)；PLNPK肽作用于PEMψ后，提取培養(yǎng)上清液，與AA大鼠FLS共同孵育，MTS方法觀察PLNPK

3、肽對AA大鼠FLS增殖的影響。 3．應用MTS法觀察PLNPK肽體外對小鼠巨噬細胞RAW264.7增殖的影響。應用MTS法和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽體外對正常大鼠PEMψ增殖和活化的影響。應用MTS法和CD86免疫組化方法觀察PLNPK肽體外對從大鼠PEMψ增殖和活化的影響。PLNPK肽作用于AA大鼠PEMψ后，提取培養(yǎng)上清液，應用ELISA方法觀察PLNPK肽對巨噬細胞分泌細胞因子TNF-α和IL-1β含量的影響。

4、 結果： 1．給藥劑量為200μg/kg/d和100μg/kg/d時，PLNPK肽可以減輕AA大鼠致炎側及對側踝關節(jié)腫脹，與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 PLNPK肽能夠明顯改善AA大鼠關節(jié)的滑膜組織增生、炎細胞浸潤及血管翳形成，減輕骨和軟骨的損傷。PLNPK肽能夠抑制AA大鼠關節(jié)滑膜組織中FLS的過度增殖和巨噬細胞的浸潤，降低巨噬細胞的活化程度。 2．藥物濃度為0.4-3.2mg/

5、ml時，PLNPK肽對體外培養(yǎng)的FLS增殖無明顯的抑制作用，與陰性對照組比較，差異沒有統(tǒng)計學意義。藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠間接抑制FLS的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢，與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，抑制率為17.89-35.49％。 3．藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)RAW264.7細胞的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢，與陰性對照組比較

6、，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，抑制率為21.24-81.68％。藥物濃度為1.6-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ的增殖，與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，抑制率為21.32-77.80％；藥物濃度為1.6-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠明顯減少體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ中CD86陽性的細胞數。藥物濃度為0.8-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠明顯抑制體外培養(yǎng)從大鼠PE

7、Mψ的增殖，其抑制作用有劑量依賴趨勢，與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，抑制率為36.41-82.85％；藥物濃度為0.4-3.2mg/ml時，PLNPK肽能夠明顯減少體外培養(yǎng)正常大鼠PEMψ中CD86陽性的細胞數。PLNPK肽藥物濃度為0.2-3.2mg/ml和0.8-3.2mg/ml時，分別能夠抑制體外培養(yǎng)AA大鼠PEMψ分泌IL-1β和TNF-α,抑制作用有劑量依賴趨勢，與陰性對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0