辛伐他汀對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎的治療作用及其對炎性細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性進(jìn)行性自身免疫性疾病，以對稱性、侵蝕性關(guān)節(jié)滑膜炎為主要特征，病變呈持續(xù)性、反復(fù)發(fā)作過程。病情逐步進(jìn)展，可引起多系統(tǒng)受累并最終導(dǎo)致骨和軟骨的破壞及關(guān)節(jié)功能障礙。RA的病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，但是大量研究證實：多種免疫活性細(xì)胞的活化，細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的共同參與，血管翳的形成是造成疾病發(fā)生發(fā)展的重要原因。目前，對于RA的治療，國內(nèi)外尚無理想藥物。傳統(tǒng)抗風(fēng)濕

2、藥物毒副作用較大，療效差且療程長，而生物制劑價格昂貴，還不能被普遍應(yīng)用。因此，尋找一種新的治療藥物或治療方法尤為重要。辛伐他汀作為一種常用的有效降低膽固醇藥物，除了其明確降低膽固醇的作用之外，還發(fā)揮著其它多方面效用，包括抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用等。但國內(nèi)用其治療RA 的報道尚罕見。由完全弗氏佐劑所誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)大鼠模型被認(rèn)為具有與RA相似的關(guān)節(jié)炎變化，本實驗即以佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠模型為基礎(chǔ)，從關(guān)

3、節(jié)腫脹度、血漿腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)濃度的變化和腫瘤壞死因子-α、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、缺氧誘導(dǎo)因子-1 α(hypoxia-inducible factor-1，HIF-1 α)在AA大鼠關(guān)節(jié)滑膜中的表達(dá)水平幾個方面，觀察辛伐他汀對AA的影響，評價其療效，探討辛伐他汀與TNF-α、VEGF、HI

4、F-1α三者之間的α相關(guān)性及辛伐他汀治療RA的機(jī)制和臨床應(yīng)用價值。 方法：(1) 選用60只成年雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別命名為Ⅰ-Ⅵ組，其中Ⅰ組為正常對照組，Ⅱ組為模型對照組，Ⅲ組為辛伐他汀低劑量組，Ⅳ組為辛伐他汀中劑量組，Ⅴ組為辛伐他汀高劑量組，Ⅵ組為甲氨喋呤組。Ⅱ-Ⅵ組每只大鼠給予尾根部皮下注射完全弗氏佐劑(CFA)0.2ml.制作AA模型。(2) 于造模致炎后第12天開始Ⅲ-V組分別給予辛伐他汀

5、1.8 mg/kg.d、3.6 mg/kg.d、7.2 mg/kg.d灌胃治療，Ⅵ組給予甲氨喋呤2.7mg/kg.w灌胃治療。(3) 注射后連續(xù)觀察大鼠的一般情況及關(guān)節(jié)炎癥表現(xiàn)，用排水法測定不同時間點各組大鼠的右足體積，并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(AI)評定。(4) 各組大鼠于第28天摘取眼球取血，離心備用，采用雙抗體夾心ELISA法測定各組大鼠血漿TNF-α濃度。(5) 采血處死后取大鼠雙膝關(guān)節(jié)滑膜組織，4％多聚甲醛固定，石蠟包埋，行蘇木素-伊

6、紅(HE)染色，光鏡下觀察關(guān)節(jié)滑膜襯里層細(xì)胞(LCC)增生，襯里下層炎細(xì)胞浸潤及血管翳形成等病理變化。(6) 對大鼠滑膜組織進(jìn)行TNF-α、VEGF及HIF-1α的SP免疫組織化學(xué)染色，采用真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。(7) 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：(1) AI:第Ⅱ組大鼠造模后各時間點的AI均高于第Ⅰ組(P<0.01)，造模后21天開始比第15天顯著升高(P<0.05)，但高峰出現(xiàn)在造模后24

7、天；Ⅲ-Ⅵ組造模后21天開始比第15天顯著升高(P<0.05)，高峰出現(xiàn)在造模后24天，Ⅴ、Ⅵ組間AI無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(2) 足腫脹體積：第Ⅱ組大鼠造模后15天右足體積高于第Ⅰ組(P<0.05)，第21-24天達(dá)到高峰，之后有所下降(P<0.01)。Ⅲ-Ⅵ組于造模第18天右足體積高于第Ⅰ組(P<0.05)，第21-24天達(dá)到腫脹高峰。Ⅴ、Ⅵ組于第21-27天明顯低于第Ⅱ組(P<0.01)，但兩組之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.0

8、5)。(3) 血漿TNF-α濃度：第Ⅱ-Ⅳ組大鼠造模后第28天血漿TNF-α濃度高于第Ⅰ組(P<0.01)，Ⅴ、Ⅵ組大鼠造模后第28天血漿TNF-α濃度與第Ⅰ組無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，Ⅴ、Ⅵ組間血漿TNF-α濃度亦無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。(4) 滑膜TNF-α、VEGF及HIF-1α的積分光密度(IOD)值、滑膜組織病理積分：造模后第Ⅱ組大鼠均顯著高于第Ⅰ組，有統(tǒng)計學(xué)差異；第Ⅴ組TNF-α的IOD值在造模后28天明顯低于第Ⅱ

9、組，第Ⅳ組VEGF及HIF-1α的IOD值在造模后28天明顯低于第Ⅱ組，具有統(tǒng)計學(xué)差異。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組的平均病理學(xué)評分均低于第Ⅱ組且有統(tǒng)計學(xué)意義。(5) 相關(guān)性分析：AI與足腫脹體積之間呈直線正相關(guān)；血漿TNF-α濃度與足腫脹體積之間呈正相關(guān)，滑膜組織TNF-α、VEGF、HIF-1α的IOD值分別與足腫脹體積、病理積分均呈直線正相關(guān)，且三者之間分別呈正相關(guān)。 結(jié)論：(1) 辛伐他汀對AA大鼠有明顯的抗炎作用，能夠降低AA大鼠

10、的關(guān)節(jié)炎指數(shù)，減輕足腫脹體積。(2) 辛伐他汀能減輕滑膜組織腫脹，減少膝關(guān)節(jié)滑膜襯里層的增生，提示提示辛伐他汀可能能延緩AA大鼠病程進(jìn)展。(3) 辛伐他汀高劑量組對AA大鼠的治療作用優(yōu)于低、中劑量組，提示辛伐他汀的治療效果可能存在劑量依賴性。(4) 辛伐他汀能明顯降低AA大鼠血漿TNF-α水平和滑膜組織TNF-α、VEGF及HIF-1α表達(dá)。(5) 辛伐他汀在抑制AA大鼠的關(guān)節(jié)炎癥、降低血清TNF-α濃度和減少滑膜TNF-α的表達(dá)方面與