靈芝三萜單體化合物對鵝膏毒肽中毒小鼠的治療作用及其機理研究.pdf

1、我國的食物中毒死亡事件主要是由毒蘑菇中毒引起的。作為有效的解毒劑，靈芝煎劑已在臨床上用于治療鵝膏菌引起的中毒。作為靈芝的主要藥效成分之一，靈芝三萜被證實具有多種藥理作用。本文探討了5種靈芝三萜單體化合物、靈芝總?cè)?GLTT)和對照藥物水飛薊賓對α-鵝膏毒肽(α-AMA)中毒小鼠的治療作用及其機理，獲得了以下結(jié)果:
　　1.靈芝總?cè)频奶崛?、分離純化:以靈芝子實體粉末∶無水乙醇=1∶20的比例，80C水浴浸提4個小時，重復(fù)該過程3

2、次，得粗提液，濃縮后得浸膏，經(jīng)大孔吸附樹脂(AB-8)吸附后梯度洗脫（首先用水洗，待流出液無色后，70％、90％乙醇梯度洗脫），收集洗脫液濃縮后凍干，得粗提物，萃取后，以不同比例(98∶2、96∶4、94∶6、92∶8、90∶10)的氯仿、甲醇為洗脫劑過硅膠柱繼續(xù)分離純化，收集氯仿∶甲醇=98∶2組分，濃縮，冷凍干燥后得到純度98％左右的靈芝總?cè)?GLTT)，經(jīng)HPLC分析表明至少含有18種以上的靈芝三萜單體化合物，其中含有靈芝酸A、

3、B、G和靈芝烯酸B。
　　2.靈芝三萜單體化合物及靈芝總?cè)频捏w外抗氧化活性:分別采用DPPH自由基清除活性的測定、鐵離子螯合能力測定、還原力測定3種方法檢測了5種靈芝酸和靈芝總?cè)频目寡趸钚?，結(jié)果表明各物質(zhì)均具有較強的抗氧化能力，其中靈芝酸C2的抗氧化能力最強，靈芝酸A的抗氧化能力最弱。
　　3.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠的治療作用:與正常組相比，中毒小鼠血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(A

4、ST)活性顯著升高，引起嚴重肝損傷。經(jīng)靈芝三萜單體、靈芝總?cè)坪退w薊賓治療后，ALT、AST的活性顯著性降低，表明5種靈芝三萜單體化合物和靈芝總?cè)凭哂兴w薊一樣的治療效果;不同劑量（5-40mg/kg/day）的靈芝酸C2均能明顯的降低中毒小鼠的血清ALT、AST活性，并且具有劑量正相關(guān)性，劑量為20 mg/kg/day時治療效果最顯著;靈芝總?cè)?、靈芝三萜單體和水飛薊賓治療后能降低致死劑量下中毒小鼠死亡率20-40％。
　　

5、4.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠抗氧化活性的影響:α-鵝膏毒肽中毒處理后，小鼠肝臟勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)以及過氧化氫酶(CAT)的活性明顯降低，而丙二醛(MDA)的含量顯著的升高。靈芝三萜單體、靈芝總?cè)坪退w薊賓治療后，能顯著的增加中毒小鼠的SOD和CAT酶活性，并顯著降低MDA的含量。不同劑量(5-40mg/kg/day)的靈芝酸C2均能大大增加中毒小鼠肝組織內(nèi)的SOD和CAT酶活性，并顯著降低MDA的含量，并且具有劑

6、量正相關(guān)性，劑量為20 mg/kg/day時效果最顯著;這些結(jié)果表明靈芝三萜具有治療作用的機理之一是其具有抗氧化活性，能清除氧自由基，減少脂質(zhì)的過氧化。
　　5.靈芝三萜單體對α-鵝膏毒肽中毒小鼠細胞凋亡的影響:α-鵝膏毒肽中毒小鼠的肝組織的DNA瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果可以觀察到明顯的DNA梯形帶，而不同劑量(5，10，20，40mg/kg/day)靈芝酸C2給藥組沒有出現(xiàn)明顯的DNA梯形帶。α-鵝膏毒肽中毒小鼠肝組織中caspase