伏毛鐵棒錘有效部位對大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎治療作用的初步研究.pdf

1、目的：探討伏毛鐵棒錘有效部位對實驗性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的治療作用及作用機(jī)制。
　　方法：1.采用溶劑法對伏毛鐵棒錘進(jìn)行提取，利用大孔吸附樹脂、陽離子交換樹脂技術(shù)對伏毛鐵棒錘有效部位進(jìn)行富集；采用紫外分光光度法對伏毛鐵棒錘非生物堿有效部位總黃酮類成分進(jìn)行含量測定。
　　2.通過MTT比色法觀測伏毛鐵棒錘有效部位、有效成分對小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的影響。
　　3.雄性SD大鼠72只，體重180±20 g，隨機(jī)分為9組。

2、除空白組外，其余各組大鼠右后足墊皮內(nèi)注射完全弗氏佐劑(Freund’s Complete Adjuvant，CFA)制備大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis, AA)模型。造模后第8天開始灌胃給藥，每日一次。30％醇部位高、中、低劑量組以30%醇洗脫部位的溶液(60，30，15 mg/kg)灌服；非生物堿部位高、中、低劑量組以非生物堿部位溶液(120，60，30 mg/kg)灌服；陽性藥對照組以雷公藤多苷片混懸液(9.

3、45 mg/kg)灌服；空白對照組、模型對照組以0.5%的CMC-Na水溶液灌服。連續(xù)灌胃給藥21天，于末次給藥2 h后對大鼠進(jìn)行相應(yīng)處理。
　　4.采用HE染色、關(guān)節(jié)腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)、體重等指標(biāo)對大鼠AA模型制備進(jìn)行評價，并利用上述指標(biāo)觀察伏毛鐵棒錘有效部位對AA大鼠的治療作用。
　　5.利用ELISA法檢測AA大鼠血清中的IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17及TNF-α的含量；免疫組化法

4、(Immunohistochemistry,IHC)觀察血管內(nèi)皮生長因子(vasc ular endothelial growth factor,VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-3(Matrixmetalloproteinases-3,MMP-3)在滑膜組織中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1.伏毛鐵棒錘干燥塊根3kg經(jīng)提取后得到了粗提浸膏0.3 kg，大孔吸附樹脂富集到了30%醇部位12.3g，得率為4.1%；取30%醇部位浸膏8 g，通過

5、陽離子交換樹脂分離，得到非生物堿部位4g，得率為50%。
　　2.伏毛鐵棒錘原藥材中總黃酮含量為1.2%，大孔吸附樹脂30%乙醇洗脫部位中總黃酮含量為9.6%；經(jīng)陽離子交換樹脂分離，得到的非生物堿有效部位總黃酮含量為29.26%。
　　3.蒙花苷(0.05，0.01mg/kg)，30%醇部位(3.12 g/kg)可明顯抑制ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)(p<0.05)。
　　4.伏毛鐵棒錘大孔吸附樹脂30%醇部位

6、(60，30 mg/k g)、非生物堿部位中劑量組(60 mg/k g)灌服，可減輕 AA大鼠繼發(fā)性足腫脹(p<0.05)，顯著降低大鼠多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)(p<0.05)，緩解AA大鼠體重的下降(p<0.05)，同時明顯減輕病變關(guān)節(jié)滑膜炎癥與增生、防止關(guān)節(jié)軟骨及骨質(zhì)的破壞。
　　5.伏毛鐵棒錘30%醇部位(60，30 mg/kg)、非生物堿部位中劑量組(60 mg/kg)抑制AA大鼠血清中炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-4、IL-5、

7、TNF-α、IL-6分泌(p<0.05)，提高I L-2、IL-17含量(p<0.05)。
　　6.伏毛鐵棒錘大孔吸附樹脂30%乙醇洗脫部位(60，30 mg/k g)，非生物堿部位中劑量組(60 mg/kg)可下調(diào) VEGF在血管壁的表達(dá)(p<0.05)，減輕血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和血管豁的新生，下調(diào)滑膜組織中MMP-3表達(dá)。
　　結(jié)論：1.伏毛鐵棒錘非生物堿有效部位發(fā)揮治療作用的主要成分可能是黃酮類成分。2.伏毛鐵棒錘有效部位