水稻條紋病毒沉默抑制子亞細(xì)胞定位和RNAi轉(zhuǎn)基因水稻培育.pdf

1、水稻條紋病毒(Rice stripe virus, RSV)是纖細(xì)病毒屬的代表成員，其編碼的蛋白NS2和NS3被鑒定為基因沉默抑制子。沉默抑制子一般具有核定位信號(hào)且定位在細(xì)胞核中，它在病毒侵染、擴(kuò)散等過(guò)程中發(fā)揮著重要作用；大多數(shù)沉默抑制子與病毒的致病性相關(guān)，它們往往能促進(jìn)病毒的積累與運(yùn)動(dòng)。研究表明，與RSV沉默抑制子作用于同一RNAi通路中的植物內(nèi)源基因RDR1具有抵抗病毒的功能。因此，本文擬對(duì)水稻條紋病毒基因沉默抑制子NS2和NS3進(jìn)

2、行亞細(xì)胞定位觀察，同時(shí)，利用水稻遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建 RSV兩個(gè)沉默抑制子共干擾和水稻RDR1-RNAi轉(zhuǎn)基因水稻，對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻進(jìn)行RSV抗性初步分析，這為進(jìn)一步研究這三個(gè)基因的功能奠定良好基礎(chǔ)。
　　本文研究?jī)?nèi)容主要分為二部分。第一部分，RSV沉默抑制子的亞細(xì)胞定位觀察。第二部分，構(gòu)建NS(2+3)-RNAi和RDR1-RNAi轉(zhuǎn)基因水稻及其RSV抗病性分析。獲得如下結(jié)果：
　　1明確了NS2和NS3的亞細(xì)胞定位。其中，NS2

3、和NS3均能定位在細(xì)胞核，但NS2在細(xì)胞核中能形成球狀顆粒，通過(guò)進(jìn)一步的共定位法發(fā)現(xiàn)NS2能與柯浩體蛋白共定位。
　　2獲得NS(2+3)-RNAi和RDR1-RNAi T0代轉(zhuǎn)基因植株。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行水稻遺傳轉(zhuǎn)化并得到轉(zhuǎn)基因水稻，通過(guò)RT-PCR、qPCR和Southern blot對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定和分析。
　　3 NS(2+3)-RNAi T0代轉(zhuǎn)基因植株對(duì)RSV表現(xiàn)出一定抗病性。與對(duì)照水稻相比，轉(zhuǎn)基因水稻在發(fā)