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文檔簡介
1、丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge),又名赤參,為唇形科(Labiatae)鼠尾草屬(Salvia)多年生草本植物,其干燥的根及根莖可入藥。作為我國常用的傳統(tǒng)中藥,丹參具有生育期短、易栽培、易繁殖、適應(yīng)性強(qiáng)、基因組小、染色體數(shù)目少(2n=16)等特性,便于進(jìn)行分子和遺傳學(xué)等生物學(xué)分析。丹參作為中藥研究的模式生物,與其相關(guān)的包括基因組測序、功能基因研究、藥用成分分析、藥效藥理分析等研究得到廣泛開展。本研究從形態(tài)學(xué)、細(xì)
2、胞學(xué)角度,首次鑒定獲得丹參的一種初級(jí)三體,并結(jié)合AFLP、RAPD分子標(biāo)記方法,分析其DNA水平上的變化,進(jìn)而為后續(xù)丹參整套初級(jí)三體的鑒定獲得、丹參基因組計(jì)劃的基因定位等研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
1.從形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)角度鑒定獲得丹參的一種初級(jí)三體,該三體細(xì)胞中含有17條染色體,較普通二倍體丹參(2n=16)增加了一條額外染色體,即其染色體組成為2n+l,經(jīng)核型分析初步確定額外染色體為8號(hào)染色體。
2.對比
3、觀察初級(jí)三體與二倍體丹參的性狀,兩者在葉形、株高等方面無明顯差異,但花、根部形態(tài)特征表現(xiàn)顯著差異,具體表現(xiàn)為:二倍體丹參花色為紫色,花冠呈明顯二唇形,有兩個(gè)可育雄蕊,而初級(jí)三體植株無花冠,且不具有可育雄蕊,表現(xiàn)為雄性不育;二倍體丹參的根部較小,分支較多,初級(jí)三體丹參的根部明顯粗大,且分支少。
3.以初級(jí)三體丹參、二倍體丹參、三倍體丹參為材料進(jìn)行遺傳相似性分析,AFLP分析結(jié)果顯示,從45對AFLP引物組合中篩選獲得26對引
4、物組合的擴(kuò)增結(jié)果條帶清晰,且差異條帶穩(wěn)定,共得到718個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn),其中呈現(xiàn)多態(tài)性的位點(diǎn)共有278個(gè),多態(tài)位點(diǎn)比率(PPB)分布在18.18%~66.67%范圍內(nèi),平均為38.70%。利用NTSYS軟件進(jìn)行的聚類分析和遺傳相似性系數(shù)分析結(jié)果顯示,初級(jí)三體丹參與三倍體丹參間的遺傳相似性系數(shù)為0.7938,而其與二倍體丹參間的遺傳相似系數(shù)為0.7256,后者相對較小,即初級(jí)三體丹參與三倍體丹參的基因組組成相對接近。對17個(gè)擴(kuò)增差異條帶回收及克
5、隆測序,測序結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行Blastx分析,共有12個(gè)差異片段的序列檢索到同源性序列,涉及醇腈酶、逆轉(zhuǎn)座子蛋白、未命名蛋白或假定蛋白等,另外5個(gè)差異片段未能檢索到同源序列。
4.以初級(jí)三體丹參及二倍體丹參為材料進(jìn)行RAPD分析,結(jié)果顯示,從113個(gè)隨機(jī)引物中篩選出34個(gè)隨機(jī)引物,其擴(kuò)增結(jié)果有差異明顯條帶,且在重復(fù)實(shí)驗(yàn)中較穩(wěn)定。共得到232個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn),其中130個(gè)位點(diǎn)呈現(xiàn)多態(tài)性,對其中5條差異條帶回收并克隆測序,
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