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文檔簡介
1、本研究采用本實驗室pIBV-S1質(zhì)粒(DQ288927)構建自殺性DNA疫苗。通過PCR擴增在S1基因兩端引入BamH I酶切位點,經(jīng)酶切插入自殺性DNA疫苗載體pSCA1,構建了自殺性DNA疫苗pSCA1-S1質(zhì)粒,經(jīng)由菌落PCR、酶切及測序鑒定目的基因被成功克隆至自殺性DNA疫苗載體pSCA1,且方向正確。以1:20的配比加入脂質(zhì)體作佐劑,制備了IBV S1基因的自殺性DNA疫苗。 為證實所構建自殺性DNA疫苗pSCA1-S
2、1質(zhì)粒的正確表達,分別取等量的重組質(zhì)粒pSCA1-S1、常規(guī)IBV S1基因DNA疫苗質(zhì)粒pcDNA-S1、空載體pSCAl轉染Vero細胞。48h后經(jīng)間接免疫熒光試驗觀察發(fā)現(xiàn),pSCA1-S1以及pcDNAS1轉染組細胞漿均可見特異性亮綠色熒光,pSCA1空載體組無熒光為陰性。證實自殺性DNA疫苗載體能成功表達S1基因。 為評價工BV自殺性DNA疫苗的免疫效果,分別用構建的自殺性DNA疫苗pSCA1-S1、常規(guī)DNA疫苗pcD
3、NAS1、空載體pSCAl和IBV滅活疫苗、PBS液對照,免疫非免疫健康雛雞。自免疫后每周采血分離血清連續(xù)五周,采用間接ELISA試驗檢測血清特異性抗體IgG,結果表明:自殺性DNA疫苗產(chǎn)生針對IBV的特異性血清抗體,免疫后第二周上升到峰值,隨后開始下降,其抗體水平與常規(guī)IBV DNA疫苗差異不顯著(P>0.05)。用流式細胞儀(FACS)測定各組CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>動態(tài)變化,結果顯示:自殺性DNA疫苗pSCA
4、1-S1組CD3<'+>水平在14d和28d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05):CD4<'+>水平在21d、35 d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05);CD8<'+>水平只在35d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05)。表明自殺性DNA疫苗能誘導機體產(chǎn)生高水平的細胞免疫。攻毒保護試驗結果表明:pSCA1-S1組攻毒相對保護率為60%;pcDNAS1組免疫雞只相對保護率低于pSCA1-S1
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