禽傳染性支氣管炎病毒S1基因與豬IgGFc基因的克隆及在Hela細胞中的融合表達.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文禽傳染性支氣管炎病毒S1基因與豬IgGFc基因的克隆及在Hela細胞中的融合表達姓名：張明富申請學位級別：碩士專業(yè)：預防獸醫(yī)學指導教師：郭愛珍20060601禽傳染性支氣管炎病毒sl基因與豬IgGFc基因的克隆及其與在Hela細咆中的融合表達禽傳染性支氣管炎病毒Sl基因與豬IgGFc基因的克隆及在Hela細胞中的融合表達摘要禽傳染性支氣管炎(113)是由禽傳染性支氣管炎病毒(IBv)引起的一種急性烈性傳染病，目前

2、主要感染雞，引起各種年齡的雞發(fā)病，是嚴重影響?zhàn)B雞業(yè)的重大傳染病之一IBV血清型眾多，變異復雜，且新的變異株不斷出現(xiàn)，給診斷和防制帶來了很多困難。Spike(S)蛋白是IBV病毒粒子表面的囊膜纖突蛋白，在翻譯后被宿主的蛋白酶切割成Sl和S2兩個部分，通過非共價鍵相連，裂解后的S1及S2都是糖蛋白。Sl蛋白與細胞受體結合有關，決定病毒的組織嗜性，在病毒血清學分類中起主要作用同時也是IBV的主要免疫原性蛋白，可以誘導中和抗體與血凝抑制抗體及特

3、異性CTL反應。IgG是介導體液免疫的主要抗體，多以單體形式存在，是動物自然感染和人工主動免疫后，機體所產(chǎn)生的主要抗體IgO經(jīng)木瓜蛋白酶水解后產(chǎn)生兩個Fab片段和一個Fc片段。Fc片段是免疫球蛋白分子中重鏈的恒定區(qū)，決定了各類免疫球蛋白抗原特異性。各種用免疫球蛋白免疫動物產(chǎn)生的抗抗體(第二抗體)即是針對免疫球蛋白Fc片段的這一特性讓Fc片段在各種免疫學方法中有著舉足輕重的地位。Fc還具有較強的與鏈球菌G蛋白(SPG)及金黃色葡萄球菌A蛋

4、白(SPA)非特異性結合的特殊生物學特性，這使其成為一種蛋白質標簽，在蛋白質鑒定和純化等下游操作過程中得到了廣泛應用IgG免疫球蛋白在體內半衰期較長，F(xiàn)c段上更具有抗原提呈細胞受體而易被抗原提呈細胞(APC)所攝取，且安全無毒性。因此將目的基因與IgGFc基因進行融合表達不僅有利于蛋白質純化鑒定，為研究蛋白質的互作提供了方便，同時表達產(chǎn)物比單純目的基因表達產(chǎn)物具有更強的免疫原性，這也預示著一種IgGFc有望成為一種分子佐劑，在基因工程疫

5、苗研究中發(fā)揮更大的作用。本研究克隆并融合表達雞IBVSI基因與豬IgGFc基因，旨在以豬[gGFe片段作為IBVSI的蛋白質標簽，以期進一步通過SPA或SPG與IgGFe的結合及S1蛋白與細胞受體的特異性結合，利用親合層析或免疫共沉淀法，進行IBV細胞受體的分離與鑒定主要研究內容包括：l，豬kGFc段基因、禽傳染性支氣管炎病毒s1基因的克隆與序列分析本研究根據(jù)GenBank收錄的M41型IBVS1序列、豬IgG重鏈序列分別設計并合成了I