禽傳染性支氣管炎病毒S1基因在畢赤酵母中表達的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究根據本課題組在GeneBank中注冊的禽傳染性支氣管炎病毒中國分離株的S1基因序列(AF397527、AF397528、AF397529和AF036937)及畢赤酵母分泌型表達載體pPIC9K的序列設計引物，用RT-PCR方法擴增出IBVS1基因。對該基因克隆測序結果表明，IBVS1基因表達片段序列長度為1566bp，編碼521個氨基酸，5'端不含信號肽序列，3'端添加了終止密碼子。用限制性內切酶SnaBⅠ和NotⅠ將S1基因和載

2、體pPIC9K酶切回收后連接，構建了S1基因的表達質粒pPIC9K-S1。用限制性內切酶BglⅡ將表達質粒pPIC9K-S1線性化，然后用電轉化的方法導入畢赤酵母GS115。將在MD平板上生長的轉化子經過PCR鑒定和表型篩選后，獲得了整合型陽性重組菌株，命名為GS115/pPIC9K-S1His+Muts。將重組菌株在1％的甲醇中進行誘導分泌表達，通過SDS-PAGE和Western-blot對表達產物進行分析，結果表明，IBVS1基因

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