miR1918在番茄與致病疫霉互作中的特性及功能分析.pdf

1、microRNA（miRNA）是生物體內(nèi)廣泛存在的一類21-24 nt的非編碼單鏈小RNA分子。它主要通過(guò)沉默其靶基因的表達(dá)，調(diào)控生物體的生長(zhǎng)發(fā)育、代謝途徑和脅迫響應(yīng)等過(guò)程。近年來(lái)的研究表明，miRNA在植物-病原物互作中也起著重要作用，與宿主的抗病性和病原物的致病性均密切相關(guān)。番茄是一種世界范圍內(nèi)廣泛種植的重要經(jīng)濟(jì)作物，而每年由致病疫霉（Phytophthora infestans）侵染導(dǎo)致的番茄晚疫病則對(duì)其生產(chǎn)造成巨大損失。目前，番

2、茄和致病疫霉互作中的miRNA并未得到深入研究，而作為同時(shí)存在于番茄和致病疫霉中的miR1918也并未得到廣泛的關(guān)注?；谏鲜霰尘?，本研究主要利用植物基因工程的研究方法探究了miR1918在番茄與致病疫霉互作中的特性及功能。
　　首先，通過(guò)生物信息學(xué)分析，預(yù)測(cè)到miR1918在番茄中的靶基因sly-TG1、sly-TG2和sly-TG3，以及在致病疫霉中的靶基因pi-TG1、pi-TG2和pi-TG3。結(jié)果表明，miR1918可能

3、與宿主抗性和病原物致病性密切相關(guān)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，在番茄與致病疫霉互作的過(guò)程中，miR1918在二者體內(nèi)呈現(xiàn)不同的表達(dá)特性，并造成相應(yīng)靶基因表達(dá)量的改變，暗示該miRNA在此過(guò)程中可能起重要作用。
　　其次，以擬南芥miR159a前體基因?yàn)楣羌苄蛄?，并通過(guò)PCR引入突變，將前體骨架上的miR159a和miR159a*分別突變?yōu)閙iR1918和miR1918*，構(gòu)建了人工miR1918(amiR1