番茄丁香假單胞菌抗病基因Pto互作蛋白功能分析.pdf

1、病原微生物對自身生命活動的調控、進化集中體現(xiàn)在與宿主的相互作用、攻防博弈中。丁香假單胞菌番茄致病變種Pseudomonas syringae pv.tomato（Pst)是引起細菌性斑點病影響番茄產量和品質的病原微生物。P.syringae pv.tomato與其宿主植物番茄之間的相互作用也是研究病原微生物-植物相互作用的一個重要模式。Pto是植物識別、防御丁香假單胞菌的抗性蛋白。Pto可以識別結合病原菌注入植物細胞的效應蛋白AvrPt

2、oB、AvrPto，并由此觸發(fā)下游防御反應，最終在侵染部位產生超敏反應誘導組織壞死，防止病原菌的定殖和繁殖。因此，Pto成為病原微生物-植物相互作用的一個樞紐蛋白，但Pto介導的免疫途徑的框架仍未完整闡明。
　　本文通過克隆番茄Pti(Pto interaction protein)基因Pti4、Pti5和Pti6，分別構建植物瞬時表達載體，利用農桿菌介導方法在煙草葉片中進行表達，并進一步利用免疫共沉淀技術，在植物體系中檢測它們與

3、番茄Pto、病原菌效應蛋白AvrPtoB的相互作用。同時，通過Pti4、Pti5和Pti6基因載體構建、番茄遺傳轉化，獲得過量表達轉基因植株。通過病原菌Pst DC3000接種，檢測Pti基因在番茄防御丁香假單胞菌侵襲中的作用。
　　實驗結果表明，利用所構建Pti4、Pti5和Pti6基因植物表達載體，在煙草中獲得了預期大小Pti4、Pti5和Pti6蛋白，并在植物體系中驗證了它們與Pto蛋白，及其活性突變體PtoY207D的相互

4、作用，表明Pti蛋白參與Pto介導的植物免疫應答途徑，但它們相互作用強弱的差異，則提示Pti4、Pti5和Pti6蛋白可能在具體功能作用中有所不同。通過免疫共沉淀進一步分析發(fā)現(xiàn)，Pti4、Pti5和Pti6蛋白與病原菌效應蛋白AvrPtoB有相互作用。AvrPtoB與Pti蛋白的互作是否使其成為病原菌毒性效應蛋白的靶標，還是促進Pto蛋白對AvrPtoB的識別，仍需進一步實驗探討。此外，通過農桿菌介導遺傳轉化，獲得了Pti4、Pti5基