參麥注射液對心肌急性缺血缺氧損傷干預(yù)作用的研究.pdf

1、缺血性心臟病是一類嚴(yán)重威脅患者生命，影響生存質(zhì)量的疾病，尋找療效突出且副作用少的防治藥物一直是醫(yī)學(xué)界研究的重點。中醫(yī)藥學(xué)是祖國傳統(tǒng)文化的精粹，在治療急、慢性心肌缺血疾病(胸痹心痛證)方面有很多優(yōu)秀的方劑，生脈散就是其中之一。參麥注射液是由生脈散經(jīng)過改良而來的現(xiàn)代中成藥，其以注射液的劑型，更為廣泛的用于臨床，尤其是急性心肌梗死的搶救。文獻中對參麥注射液的研究報道很多，但主要偏重于臨床應(yīng)用。為了明確闡釋中藥作用的機理，以利于將中醫(yī)藥推廣到全

2、世界，我們有必要對參麥注射液治療心肌缺血缺氧的機制進行深入探討。 本課題在大量文獻整理、分析的基礎(chǔ)上，分別從整體與細(xì)胞水平，試圖用中醫(yī)“毒損心絡(luò)”的理論更好的辨析參麥注射液保護急性心肌梗死的機理，同時從心肌細(xì)胞最重要的細(xì)胞器一線粒體著手，探尋參麥注射液抑制缺氧心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵作用環(huán)節(jié)。 課題實驗研究分為兩部分。第一部分為體內(nèi)實驗，觀察參麥注射液對實驗性急性心肌梗死板大鼠心肌組織形態(tài)學(xué)和氧化應(yīng)激損傷的影響。第二部分為體外

3、實驗，探索參麥注射液干預(yù)缺氧心肌細(xì)胞線粒體凋亡途徑的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 方法: 1 .體內(nèi)實驗 結(jié)扎大鼠冠狀動脈左前降支，造成急性的心肌梗死損傷。將56只雄性SD大鼠隨機分成3組：假手術(shù)組(Sham)、梗死模型組(M)和參麥注射液干預(yù)組(SM)，各組內(nèi)均設(shè)6h與12h觀察組。SM組按照人與大鼠的體表面積折算給藥量，在造成大鼠心肌梗死前3d開始給予參麥注射液4.3ml/kg·d，術(shù)前1h給藥1次。M組和Sham組大鼠腹腔注

4、射等量的生理鹽水。 取動物心臟，制成病理切片，光鏡觀察HE染色和苦味酸堿性復(fù)紅染色顯示的心肌組織結(jié)構(gòu)改變和缺氧狀況，電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)的變化。同時測定血清CK-MB和LDH的活性，判斷心肌損傷程度；檢測血清和心肌組織SOD酶活性、MDA和NO含量，討論參麥注射液預(yù)處理對急性心肌缺血的干預(yù)作用。 2 .體外實驗 進行大鼠乳鼠心肌細(xì)胞的體外原代培養(yǎng)。實驗分為3組：對照組(Control)、缺氧模型組(M)和參麥

5、注射液干預(yù)組(SM)，各組內(nèi)均設(shè)6h與12h觀察組。M組利用95％N2+5％CO<,2>混合無氧氣體，造成心肌細(xì)胞急性缺氧。SM組細(xì)胞缺氧處理前24h在培養(yǎng)液中加入5ml/L的參麥注射液，缺氧培養(yǎng)的同時亦加入5ml/L的參麥注射液進行干預(yù)。 首先通過PI染色檢測細(xì)胞周期、Annexin V-FITC/PI雙染法測定細(xì)胞早期凋亡率、DNA凝膠電泳、TUNEL染色和透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等幾種鑒定凋亡細(xì)胞方法的聯(lián)合應(yīng)用，判斷缺氧后

6、心肌細(xì)胞是否發(fā)生凋亡。繼而用激光共聚焦顯微鏡觀察MitoTracker Green標(biāo)記的線粒體的形態(tài)變化，MTT法檢測線粒體的活性，尋找線粒體與參麥注射液保護缺氧心肌細(xì)胞機制之間的聯(lián)系。最后，從胞漿Caspase3/7酶活性、線粒體 膜電位以及細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>水平變化等線粒體凋亡途徑相關(guān)指標(biāo)改變，探索參麥注射液抑制缺氧心肌細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 結(jié)論: 急性心肌梗死的發(fā)生發(fā)展過程符合中醫(yī)“毒損心絡(luò)”的理論，氧化