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文檔簡介
1、目的:檢測急性高眼壓后,大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子與轉(zhuǎn)錄激活子3(p-STAT3)蛋白和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)的動態(tài)變化。探討p-STAT3和MMP-9與視網(wǎng)膜節(jié)細胞凋亡的關(guān)系。 方法:正常成年SD大鼠35只(山東大學動物實驗中心提供),體重(200±25)g,雌雄不限。隨機分成5組,分別為高眼壓后6h、12h、24h、48h和72h組,每組7只,任選一眼為手術(shù)眼,另一眼為自身對照組。1%異戊巴比妥鈉30mg·kg-1
2、腹腔注射全麻,利用前房高壓灌注法造成大鼠視網(wǎng)膜缺血60min,解除高眼壓,建立急性高眼壓缺血再灌注模型,并于急性高眼壓后6h、12h、24h、48h和72h4%多聚甲醛大鼠心臟灌注固定,摘取眼球。4%多聚甲醛固定液固定24h,制備石蠟眼球標本。采用免疫組化SP法檢測大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)p-STAT3和MMP-9蛋白表達。一抗為兔抗鼠p-STAT3單克隆抗體(Cell Signal,1:200)和兔抗鼠MMP-9多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限
3、公司,1:200),二抗山羊抗兔IgG,0.05%二氨基聯(lián)苯胺鹽酸鹽(DAB)顯色試劑顯色。經(jīng)p-STAT3、MMP-9免疫組織化學染色的視網(wǎng)膜切片,用LEICA IM50型全自動醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)測量其平均光密度值。數(shù)據(jù)資料以均數(shù)±標準差表示,結(jié)果以SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析t檢驗。以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。 結(jié)果: 1.正常視網(wǎng)膜p-STAT3和MMP-9呈弱陽性表達。 2.p-STAT3陽性染色表達于急
4、性高眼壓6h出現(xiàn),12h達高峰,24h后表達含量逐漸下降,72h接近正常。陽性表達主要位于視網(wǎng)膜內(nèi)核層和節(jié)細胞胞核。 3.MMP-9陽性染色表達于急性高眼壓6h出現(xiàn),24h達高峰,48h后表達含量逐漸下降,72h接近正常。陽性表達主要位于神經(jīng)節(jié)細胞胞漿和內(nèi)叢狀層。 結(jié)論: 1.本實驗證明在急性高眼壓損傷過程p-STAT3,MMP-9均發(fā)生了表達變化,二者共同參與急性高眼壓視網(wǎng)膜缺血再灌注的病理改變。 2.
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