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文檔簡介
1、目的:
觀察電壓依賴性陰離子通道2(VDAC2)在大鼠高位脊髓損傷后心肌細胞線粒體凋亡通路中的表達,初步探討VDAC2在高位脊髓損傷后心肌細胞凋亡中的作用。
方法:
健康雄性SD大鼠(清潔級)48只,體重200~250 g。隨機分為八組(每組n=6):假手術(shù)對照(TC)組:假手術(shù)后6 h(TC1)、假手術(shù)后12 h(TC2)、假手術(shù)后24 h(TC3)和假手術(shù)后48 h(TC4);高位脊髓損傷組(TS):S
2、CI損傷后6 h(TS1)、12 h(TS2)、24 h(TS3)和48 h(TS4)。采用改良的Allens打擊法,建立高位脊髓損傷大鼠模型,假手術(shù)組只暴露脊髓,不進行打擊。剪取SD大鼠心尖部心肌組織,使用透射電鏡觀察心肌細胞的形態(tài)學(xué)特征;通過原位末端標記法(Tunel法)檢測心肌細胞的凋亡率;采用Western blot法檢測心肌組織Bax、Bcl-2和VDAC2蛋白的水平,RT-PCR法測定Bax、Bcl-2和VDAC2 mRNA
3、的表達。
結(jié)果:
①透射電鏡結(jié)果顯示TC組各時點大部分心肌細胞細胞膜完整;肌原纖維、肌絲排列整齊,清晰可見;線粒體結(jié)構(gòu)完整,未見空泡樣變性和腫脹;閏盤結(jié)構(gòu)正常,糖原顆粒豐富,心肌損傷情況明顯比TS組同時相輕。
②Tunel結(jié)果顯示TS組較TC組存在明顯的細胞凋亡(P<0.01)。
?、踂estern blot和RT-PCR結(jié)果相同,顯示TC組Bax、Bcl-2和VDAC2均有表達,各時相點間差異無統(tǒng)
4、計學(xué)意義;TS組Bax表達增高,以TS3為著,各時相點與TC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);TS組Bcl-2表達量于損傷后第6 h、12 h、24 h下降,損傷后第48h表達量恢復(fù),各時相點與TC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。同時,TS組Bax/Bcl-2比值增高,TS組與TC組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。TC組VDAC2有較高水平表達,TS組12 h、24 h、48 h表達受抑制,與TC組比較,差異均
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