甲真菌病患者血清IL-12、IFN-γ、NO、iNOS水平及其相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：甲真菌病是由致病真菌侵犯指(趾)甲引起的一種慢性、感染性疾病，也是皮膚科常見病、多發(fā)病。由于各種眾所周知的原因，甲真菌病發(fā)病率有逐年增長的趨勢。紅色毛癬菌是一種最常見的親人性致病性皮膚癬菌，呈世界性分布，也是我國甲真菌病中最常見的致病菌。由于該菌所引起的甲真菌病較難治愈而且容易復(fù)發(fā)和再感染，從而導(dǎo)致患者生活質(zhì)量的下降，是目前臨床上亟待解決的問題。隨著抗真菌免疫研究的進(jìn)展，大量的研究報道，天然免疫在抗真菌免疫中可直接殺傷病原體并能激

2、發(fā)獲得性免疫。入侵的真菌等病原體被天然免疫系統(tǒng)識別是激發(fā)宿主產(chǎn)生免疫應(yīng)答的第一步。一旦真菌感染，體內(nèi)的吞噬細(xì)胞活化，分泌包括白細(xì)胞介素12(Interleukin-12，IL-12)的多種細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)。IL-12是觸發(fā)天然免疫應(yīng)答的關(guān)鍵因子，也是激活輔助性T淋巴細(xì)胞(Helper T lymphocyte，Th)介導(dǎo)I型免疫應(yīng)答的必要條件。IL-12對天然免疫和獲得性免疫都發(fā)揮重要作用，其架起天然免疫和獲得性免疫之間的橋梁，是一種

3、前炎癥細(xì)胞因子。IL-12能強(qiáng)有力地誘導(dǎo)天然免疫的自然殺傷細(xì)胞(Natural kill cell，NK)、抗原提呈細(xì)胞(Antigen presentingcell，APC)及獲得性免疫的Th1細(xì)胞等產(chǎn)生干擾素-γ(Interferon-γ，IFN-γ博細(xì)胞因子。INF-γ又是一個潛在的強(qiáng)有力的IL-12誘導(dǎo)因子，它的產(chǎn)生依賴于IL-12，但它產(chǎn)生以后反過來增加IL-12的分泌。IFN-γ作用于巨噬細(xì)胞產(chǎn)生誘生型一氧化氮合酶(indu

4、cible nitric oxide synthase，iNOS)，生成一氧化氮(Nitric oxide，NO)，而NO是清除病原體的重要效應(yīng)分子。上述因子由此構(gòu)成一個正反饋途徑，同時作為一個功能單位，可促進(jìn)I型免疫應(yīng)答，成為聯(lián)系天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答的紐帶。目前對甲真菌病具體免疫發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚。甲做為機(jī)體角質(zhì)層相延續(xù)的結(jié)構(gòu)，同樣也受到機(jī)體天然免疫和獲得性免疫的調(diào)節(jié)。既往的研究證實，在皮膚真菌感染中，人體內(nèi)很多具有免疫功能的細(xì)

5、胞及其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮了重要的作用，諸如皮膚朗格漢斯細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞以及Th1和Th2細(xì)胞的參與使得真菌感染呈現(xiàn)不同的發(fā)展進(jìn)程。 有研究表明人體對毛癬菌抗原的免疫應(yīng)答特性與皮膚癬菌病的嚴(yán)重程度相關(guān)，紅色毛癬菌變態(tài)反應(yīng)原Tri r 2能夠誘導(dǎo)皮膚產(chǎn)生即發(fā)型(IH)和遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)。其中即發(fā)型超敏反應(yīng)與以輕度炎癥病變和IgE抗體出現(xiàn)為特征的慢性持續(xù)性感染有關(guān)，遲發(fā)型超敏反應(yīng)與嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)及對再次感染

6、有一定耐受能力有關(guān)，說明細(xì)胞免疫對于清除皮膚癬菌感染和建立保護(hù)機(jī)制可能更為有效。在甲真菌病感染人群中是否存在著免疫功能的變化，近年來研究發(fā)現(xiàn)，甲真菌病患者存在外周血T細(xì)胞亞群異常變化，其中CD3+、CD4+及CD4+/CD8+比值降低，CD8+升高，提示甲真菌病患者可能存在免疫系統(tǒng)的失衡，細(xì)胞免疫在該類疾患的發(fā)病中起到一定的作用。 本研究擬通過檢測甲真菌病患者血清中IL-12、IFN-γ、NO和iNOS水平，初步探討這四種因子

7、是否在甲真菌病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中起到作用，進(jìn)一步了解宿主的天然免疫狀況與真菌致病易感性的關(guān)系以及獲得性免疫在抗皮膚癬菌免疫中所起的作用。 方法：病例組35例甲真菌病患者均來自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診。病例組(甲真菌病組)入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均有典型的甲真菌病臨床表現(xiàn)，真菌直接鏡檢陽性且培養(yǎng)鑒定為紅色毛癬菌；②年齡18～55歲，非妊娠及哺乳期婦女；③就診前1周內(nèi)未外用或1個月內(nèi)未系統(tǒng)應(yīng)用過抗真菌藥物，以及2個月內(nèi)未用皮質(zhì)類固

8、醇激素和免疫抑制劑等影響全身免疫功能藥物的患者。④對參加本研究知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：排除銀屑病、慢性濕疹、甲營養(yǎng)不良等疾病所致甲損害患者以及伴有自身免疫性疾病、腫瘤、急性感染和嚴(yán)重系統(tǒng)性疾患的甲真菌病患者。對照組：來自本院健康醫(yī)護(hù)人員及志愿者共20例，均無皮膚真菌感染病史和自身免疫性疾病及家族史。經(jīng)t檢驗，性別、年齡與病例組無顯著差異。病例組、對照組均采集靜脈血5ml分離血清-20℃保存，ELISA法檢測血清中IL-12和IFN-γ水平，

9、分光光度法檢測血清中NO、iNOS水平，具體操作嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。所得數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，統(tǒng)計學(xué)方法運用兩樣本t檢驗和直線相關(guān)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1.血清中IL-12測定結(jié)果(單位pg/ml)：甲真菌病組血清IL-12平均值為11.9345±0.9783，對照組為12.4281±1.3230。病例組雖然低于對照組水平，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。 2.血

10、清中IFN-γ測定結(jié)果(單位pg/ml)：甲真菌病組血清IFN-γ平均值為12.7137±1.3526，低于正常對照組水平14.1999±1.5832，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。 3 血清中NO測定結(jié)果(單位μmol/L)：甲真菌病組血清NO平均值為38.8361±4.4479，明顯低于正常對照組54.4573±5.8404，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。 4 血清中iNOS測定結(jié)果(單位U/ml)：甲真菌病組血清iNO

11、S平均值為13.4605±2.1024，明顯低于正常對照組23.6642±1.9522，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.01。 5 NO與iNOS經(jīng)過直線相關(guān)分析有相關(guān)性，呈直線正相關(guān)關(guān)系(r=0.811，P<0.01)。 結(jié)論： 1.紅色毛癬菌感染甲真菌病患者外周血血清IFN-γ、NO及iNOS表達(dá)下降。 2.結(jié)果表明紅色毛癬菌感染甲真菌病患者可能存在免疫功能低下，這可能是導(dǎo)致感染易反復(fù)，病程遷延的原因之一.