GLP-1類似物對高糖刺激的心肌細胞血管緊張素Ⅱ水平的影響及可能機制.pdf

1、目的:
　　心血管疾病作為糖尿病(DM)的主要并發(fā)癥，是DM患者的主要死因。近年的研究表明，糖尿病心肌病(DCM)與DM患者心血管疾病的高發(fā)病率和高死亡率密切相關(guān)。過度激活的腎素血管緊張素系統(tǒng)(RAS)在DCM的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。有文獻報道，高糖刺激能夠激活磷酸化p-p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白以促進血管緊張素原(AGT)基因的表達。高糖狀態(tài)下，局部RAS的主要效應(yīng)成分血管緊張素Ⅱ(ANGⅡ)的表達明顯增加，但p

2、-p38MAPK與ANGⅡ之間是否具有關(guān)聯(lián)尚不清楚。前期工作發(fā)現(xiàn)，胰高糖素樣肽1(GLP-1)可顯著改善糖尿病大鼠心肌的病理病變包括心肌細胞凋亡及心肌間質(zhì)纖維化，而這些病理改變的發(fā)生、發(fā)展與心肌局部RAS的活性增高有著密切聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)Exendin-4（GLP-1受體激動劑）能夠抑制脂毒性引起的p-p38MAPK的激活來保護內(nèi)皮細胞。GLP-1是否能夠抑制高糖狀態(tài)下p38MAPK介導(dǎo)的心肌局部ANGⅡ的表達，來發(fā)揮心肌保護作用尚未見文

3、獻報道。故本研究擬以H9c2大鼠心肌細胞為研究對象，探討在高糖狀態(tài)下，p-p38MAPK蛋白在心肌局部ANGⅡ表達中的作用以及GLP-1類似物利拉魯肽對ANGⅡ表達的影響，并初步探索p-p38MAPK在GLP-1影響心肌細胞ANGⅡ表達中所扮演的角色，從而為臨床防治DCM、降低DM患者心血管疾病死亡率提高新的策略。
　　方法:
　　1.培養(yǎng)H9c2心肌細胞，分為低糖組（D-葡萄糖5.5mmol/L）、高糖組（D-葡萄糖25m

4、mol/L）、高糖+p38MAPK抑制劑組(D-葡萄糖25mmol/L+S B20358010umol/L)、高滲組（D-葡萄糖5.5mmol/L+甘露醇19.5mmol/L），分別于0、12、24、48小時收集細胞，使用血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，ANGⅡ)ELISA試劑盒檢測細胞上清液及裂解液中ANGⅡ濃度。
　　2.培養(yǎng)H9c2細胞，分為低糖組（NG組）、高糖組（HG組）、高糖+利拉魯肽干預(yù)組（L10組:10nM

5、利拉魯肽;L100組:100nM利拉魯肽;L1000組:1000nM利拉魯肽），干預(yù)24小時后收集細胞，使用ANGⅡELISA試劑盒檢測細胞上清及裂解液中ANGⅡ濃度。
　　3.培養(yǎng)H9c2心肌細胞，分為低糖組（A組）、高糖組（B組）、高糖+利拉魯肽干預(yù)組（C組:100nM利拉魯肽）、高糖+p38MAPK抑制劑(D組:SB20358010umol/L)，于24小時后收集細胞提取蛋白，用Western Blotting方法檢測p-p

6、38MAPK的蛋白表達。
　　結(jié)果:
　　1.高糖分別刺激H9c2大鼠心肌細胞12h、24h、48h。發(fā)現(xiàn)與低糖組相比，高糖刺激24h、48h后，細胞上清液及裂解液中ANGⅡ水平均顯著升高(P＜0.01)，而高滲組細胞上清液及裂解液中ANGⅡ水平在12h、24h、48h均無顯著差異(P＞0.05)。
　　2.與低糖組相比，高糖刺激24h后，心肌細胞p-p38MAPK蛋白表達顯著增高(1.0900±0.04359vs0.

7、6400±0.06254,P＜0.01)。
　　3.給予H9c2大鼠心肌細胞p38MAPK抑制劑SB203580預(yù)處理后，高糖分別干預(yù)12h、24h、48h。發(fā)現(xiàn)與高糖組相比，SB203580預(yù)處理后給予高糖干預(yù)24h、48h組細胞上清液及裂解液中ANGⅡ水平顯著下降（P＜0.05）。
　　4.在高糖狀態(tài)下，分別給予H9c2大鼠心肌細胞10nM、100nM、1000nM利拉魯肽干預(yù)24h。發(fā)現(xiàn)與高糖組相比，利拉魯肽干預(yù)后細胞

8、裂解液中ANGⅡ水平均顯著下降(P＜0.01)，但細胞上清液中ANGⅡ水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.在高糖狀態(tài)下，給予H9c2大鼠心肌細胞100nM利拉魯肽干預(yù)24h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)與高糖組相比，利拉魯肽干預(yù)后p-p38MAPK蛋白表達明顯下降（0.5167±0.05686vs1.0900±0.04359，P＜0.01）;與SB203580干預(yù)后相比無明顯差異（0.5167±0.05686vs0.0500±0.02828，P