石膽草中苯乙醇苷類和黃酮碳苷類成分提取純化工藝研究.pdf

1、　　目的：建立石膽草藥材中有效成分苯乙醇苷類和黃酮碳苷類成分的質(zhì)量控制方法,并優(yōu)化石膽草藥材中有效成分苯乙醇苷類和黃酮碳苷類成分的提取、純化工藝,為石膽草藥材的進一步開發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
　　方法：(一)分別以1′-O-β-D- (3,4-二羥基苯乙基)- 4′-O-咖啡?；?β-D-芹糖(1→3′)-β-D-葡萄糖-(1→6′) -葡萄糖苷(PGs),5,4′-二羥基-6,7-二甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(

2、1→2)]-β-D-葡萄糖黃酮碳苷(FC-GsⅢ)為對照品,采用紫外分光光度法(UV)測定石膽草中總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的含量,并采用RP-HPLC法測定石膽草中1′-O-β-D- ( 3 , 4-二羥基苯乙基)- 4′-O-咖啡?；?β-D-芹糖(1→3′)-β-D-葡萄糖-(1→6′) -葡萄糖苷(PGs)、5,7,4′-三羥基-6-甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(1→2)]-β-D-葡萄糖黃酮碳苷(FC-GsⅠ)、5,3′,4′

3、-三 羥 基 -7,8-二 甲 氧 基 -6-C-[β-D-木 糖 -(1→2)]-β-D-葡 萄 糖 黃 酮 碳 苷(FC-GsⅡ)、5,4′-二羥基-6,7-二甲氧基-8-C-[β-D-木糖-(1→2)]-β-D-葡萄糖黃酮碳苷(FC-GsⅢ)等多個指標(biāo)性成分的含量,從而建立石膽草藥材的質(zhì)量控制方法。(二)以總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的提取量為考察指標(biāo),運用平行試驗考察溶劑濃度、提取溫度、提取時間、固液比、提取次數(shù)等單個因素對提取效率的

4、影響,正交試驗考察主要因素間交互作用對提取效率的影響,最終優(yōu)選出最佳的提取工藝。(三)以總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的總收率為考察指標(biāo),對X-5、AB-8、D4006、NKA-Ⅱ、HPD-100、HPD-450、HPD-600七種不同性質(zhì)的大孔吸附樹脂的吸附-解吸性能進行考察,確定最優(yōu)的純化用樹脂類型,再分別對最優(yōu)純化樹脂的各個純化參數(shù)進行考察,最終選出最佳的純化工藝條件。
　　結(jié)果：(一)石膽草藥材中總苯乙醇苷的含量約為 0.85

5、%,在 2.67~26.7 mg·L-1(r=0.9999)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率為 99.04%,RSD 為0.79%(n=6)；總黃酮碳苷的含量約為 1.93%,在2.69~26.9 mg·L-1(r=0.9999)范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率為 99.77%, RSD 為 1.04%(n=6)。PGs、FC-GsⅠ、F C-G sⅡ、FC-GsⅢ這四種成分的含量分別為 0.56%、0.51%、0.17%、

6、1.05%,且線性關(guān)系亦良好,r均大于0.999,線性范圍分別為0.4~3.2μg (PGs)、0.32~2.56μg (FC-GsⅠ)、0.4~3.2μg (FC-GsⅡ)、0.46~3.52μg (FC-GsⅢ),平均加樣回收率>98.9%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD<2.08%(n=6)。(二)以總苯乙醇苷提取量為考察指標(biāo)時,所得最佳提取工藝條件為 A1~2B3C1~3D3,以總黃酮碳苷提取量為考察指標(biāo)時,所得最佳提取工藝條件為 A2B3

7、C1~3D2~3。結(jié)合實際工業(yè)生產(chǎn),最終確 定石膽草中苯乙醇苷和黃酮碳苷的最佳提取工藝為 A2B3C1~3D3,即藥材加 12 倍量 50%乙醇,80℃回流提取 2 次,每次提取時間 1.5~3.5h。(三)以大孔吸附樹脂對總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的吸附-解吸率為考察指標(biāo),確定 HPD-100 為最佳純化用樹脂類型,且最佳的純化工藝條件為：石膽草提取物吸附濃度為 0.08g·mL-1,與HPD-100樹脂比為0.22g：1mL,樹脂徑高比

8、為1：6,除雜劑為5倍量柱體積的水,除雜流速為 3 BV·h-1,洗脫劑為 6 倍量柱體積的 30%乙醇,洗脫流速為 2 BV·h-1。
　　結(jié)論：(一)采用 UV 結(jié)合 HPLC 建立的石膽草中苯乙醇苷類和黃酮碳苷類成分的含量測定方法,測定石膽草藥材中總苯乙醇苷和總黃酮碳苷以及 PGs、FC-GsⅠ、F C-G sⅡ、FC-GsⅢ的含量,分別為 0.85%、1.93%、0.56%、0.51%、0.17%、1.05%,并且該方

9、法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確,可用于石膽草藥材的質(zhì)量控制；(二)以總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的提取量為考察指標(biāo),采用平行實驗結(jié)合正交試驗得到最佳提取工藝：藥材加 12 倍量 50%乙醇,80℃回流提取 2 次,每次提取時間 1.5~3.5h；(三)以大孔吸附樹脂對總苯乙醇苷和總黃酮碳苷的吸附-解吸率為考察指標(biāo),得到的最佳純化工藝：石膽草提取物吸附濃度為 0.08g·mL-1 ,與HPD-100樹脂比為0.22g：1mL,樹脂徑高比為1：6,除雜劑為