大豆?jié)饪s蛋白乙醇提取物中異黃酮、皂苷的提取與純化.pdf

1、以低溫豆粕乙醇提取物為原料，采用溶劑萃取法和柱層析法提取與精制總異黃酮、總皂苷。通過(guò)單因素試驗(yàn)得出單因素最佳條件組合：萃取溫度60℃、萃取時(shí)間60 min、料液比1:2。柱層析單因素最佳條件組合：層析柱21×310mm，硅膠填料，上樣量2.5 g，先用120 mL丙酮(含0.5 mL甲酸)、再用100 mL70％甲醇進(jìn)行梯度洗脫。取兩份50 g的低溫豆粕乙醇提取物為原料，分別用丙酮和正丁醇按照溶劑法的最佳條件萃取，得到丙酮萃取產(chǎn)品3.1

2、8 g和正丁醇萃取產(chǎn)品4.73 g。將兩種萃取產(chǎn)品分別用柱層析法最佳條件精制，最后從丙酮萃取物中精制異黃酮產(chǎn)品0.61 g其中總異黃酮含量65.19％，總得率1.22％，從正丁醇萃取物中精制皂苷產(chǎn)品1.27 g，其中總皂苷的含量85.73％，總得率2.45％。 采用柱層析和薄層色譜結(jié)合方法，對(duì)原料中異黃酮和皂苷的單體組分進(jìn)行了分離，并用薄層、高效液相色譜和電噴霧質(zhì)譜對(duì)產(chǎn)品分析鑒定。通過(guò)單因素試驗(yàn)得出柱層析分離異黃酮和皂苷的最佳條

3、件為：固定相100～200目硅膠，填柱高度15 cm，上樣量2．O g，氯仿-甲醇-水-乙酸(70:30:10:.5)為洗脫劑，每5 mL收集一次洗脫液，一共收集80管。將柱層析分離出成分相對(duì)單一的產(chǎn)品用薄層色譜再分離后，得到6種異黃酮單體，把其中兩種葡萄糖苷水解后用電噴霧質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)，確定得到的是大豆苷元和染料木素。用重結(jié)晶法對(duì)柱層析分離得到的第38管洗脫液中生成的晶體進(jìn)行處理，產(chǎn)品用質(zhì)譜檢測(cè)，結(jié)果表明重結(jié)晶的產(chǎn)品為大豆皂苷Ba。

4、 考察了紫外分光光度法檢測(cè)異黃酮含量的方法。為彌補(bǔ)現(xiàn)有紫外分光光度法檢測(cè)異黃酮時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品與待測(cè)樣品中異黃酮組分不能保持一致的弊端，直接從原料純化的異黃酮樣品，利用高效液相色譜對(duì)其中的部分異黃酮單體進(jìn)行定量后，作為紫外分光光度法檢測(cè)異黃酮的標(biāo)準(zhǔn)品，配成一系列濃度在UV258nm處進(jìn)行紫外掃描，建立異黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線C=11.893A+0.091，R<'2>=0.9999，檢測(cè)限為0.84 μg·ml<'-1>，加樣回收率為99.7％，6次