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文檔簡(jiǎn)介
1、目的: 1.選用小鼠藥物性心肌梗死模型,觀察普伐他汀與粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)內(nèi)皮前體細(xì)胞的動(dòng)員規(guī)律并比較兩者的動(dòng)員效果及特點(diǎn),篩選最佳動(dòng)員藥物及最佳干預(yù)時(shí)間。 2.探討不同麻醉深度和呼吸管理模式下,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支制作大鼠急性心肌梗死模型的優(yōu)劣,觀察心臟形態(tài)學(xué)及心功能變化。 3.采用粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員內(nèi)皮前體細(xì)胞治療大鼠心肌梗死,通過(guò)心臟超聲檢查、病理分析及在體和離體心功能測(cè)定,全面評(píng)價(jià)粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)心
2、肌梗死大鼠的心功能改善作用。 4.觀察常用靜脈麻醉藥異丙酚和咪唑安定對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子釋放的影響以及對(duì)內(nèi)皮前體細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員效果的影響。 方法: 1.采用腹腔注射異丙腎上腺素制作小鼠藥物性心肌梗死模型,待模型動(dòng)物穩(wěn)定后,分別注射普伐他汀、粒細(xì)胞集落刺激因子及等量生理鹽水5天,觀察用藥開(kāi)始第1、5、7、9天的CD34+單個(gè)核細(xì)胞及內(nèi)皮前體細(xì)胞的數(shù)目,測(cè)定血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的濃度并對(duì)兩者進(jìn)行相關(guān)性分析
3、。 2.在分別采用面罩通氣法及氣管切開(kāi)法的呼吸管理模式下,利用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支制作大鼠急性心肌梗死模型,記錄存活率與麻醉蘇醒時(shí)間;進(jìn)行HE染色、Masson染色和伊文氏蘭/TFC染色確定心肌梗死模型的成功;四周后行在體心功能測(cè)定,并采用Langendorff裝置進(jìn)行不同前負(fù)荷下心功能變化的離體測(cè)定。 3.雄性Wistat大鼠36只,隨機(jī)分為對(duì)照組、心肌梗死組和粒細(xì)胞集落刺激因子組,其中粒細(xì)胞集落刺激因子組腹腔注射粒細(xì)胞
4、集落刺激因子5天,對(duì)照組和心肌梗死組腹腔注射等量生理鹽水5天。于用藥開(kāi)始第7天時(shí)球后靜脈采血,流式細(xì)胞儀測(cè)定CD34+單個(gè)核細(xì)胞及內(nèi)皮前體細(xì)胞的數(shù)目;ELISA測(cè)定血漿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和C-反應(yīng)蛋白的濃度; RT-PCR檢測(cè)心肌梗死交界區(qū)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體FLK-1mRNA的表達(dá)。第4周時(shí)通過(guò)超聲、病理及在體和離體心功能測(cè)定,對(duì)心肌梗死大鼠的心功能進(jìn)行全面評(píng)價(jià)。 4.大鼠急性心肌梗死模型穩(wěn)定后隨機(jī)選取36只,連續(xù)腹腔注射粒
5、細(xì)胞集落刺激因子5天,隨機(jī)分為三組,于用藥開(kāi)始第7天時(shí)分別持續(xù)泵入生理鹽水、咪唑安定及丙泊酚,6h后球后靜脈采血,流式細(xì)胞儀測(cè)定CD34+單個(gè)核細(xì)胞及內(nèi)皮前體細(xì)胞的數(shù)目;ELISA測(cè)定血漿血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和C-反應(yīng)蛋白的濃度; RT-PCR檢測(cè)心肌梗死交界區(qū)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體FLK-1mRNA的表達(dá)。于第4周時(shí)行在體心功能測(cè)定后,處死大鼠取梗死交界區(qū)心肌組織行CD34免疫熒光染色,觀察并測(cè)量血管密度。 結(jié)果: 1.
6、CD34+單個(gè)核細(xì)胞和內(nèi)皮前體細(xì)胞的數(shù)目及血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的濃度均于用藥開(kāi)始第7天時(shí)達(dá)到高峰;粒細(xì)胞集落刺激因子的動(dòng)員作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于普伐他汀的動(dòng)員效果;粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員內(nèi)皮前體細(xì)胞的作用強(qiáng)于對(duì)CD34+單個(gè)核細(xì)胞的動(dòng)員作用。 2.兩種通氣方法下均可制備確定的心肌梗死模型,存活率無(wú)差別,HE染色、Masson染色和伊文氏蘭/TTC染色均可觀察到明顯的心肌梗死區(qū)。在體及離體心功能測(cè)定兩者無(wú)差別,但與對(duì)照組相比,心臟的收縮、
7、舒張及儲(chǔ)備功能均顯著下降。 3.粒細(xì)胞集落刺激因子提高了血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的濃度,增強(qiáng)了心肌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體FLK-1mRNA的表達(dá),增加了外周血中CD34+單個(gè)核細(xì)胞和內(nèi)皮前體細(xì)胞的數(shù)目,使心肌梗死交界區(qū)的毛細(xì)血管密度增加,同時(shí)超聲及在體和離體心功能測(cè)定結(jié)果顯示心肌梗死大鼠的心功能得到改善。 4.咪唑安定可以促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的釋放,并使粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員內(nèi)皮前體細(xì)胞的作用加強(qiáng),促進(jìn)了心肌梗死交
8、界區(qū)血管的新生。而丙泊酚無(wú)以上兩種作用。但是,兩種靜脈麻醉藥均對(duì)心肌梗死后的心功能有改善作用。 結(jié)論: 1.普伐他汀與粒細(xì)胞集落刺激因子均有動(dòng)員內(nèi)皮前體細(xì)胞的作用,均能提高血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子濃度及組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)。其中,粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)內(nèi)皮前體細(xì)胞的動(dòng)員作用與血漿中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子濃度的增加有關(guān)。 2.采用面罩通氣行呼吸管理,結(jié)扎冠狀動(dòng)脈前降支制作大鼠心肌梗死模型,與傳統(tǒng)的氣管切開(kāi)法相比較,提
9、高了制作動(dòng)物模型的速度,此外避免了氣管切開(kāi)導(dǎo)致的頸部粘連,為心功能評(píng)價(jià)時(shí)分離右側(cè)頸總動(dòng)脈置入心導(dǎo)管及氣管切開(kāi)制作Langendoff模型創(chuàng)造了良好的條件。 3.粒細(xì)胞集落刺激因子能夠動(dòng)員骨髓中的內(nèi)皮前體細(xì)胞進(jìn)入外周血并進(jìn)而歸巢于缺血區(qū),增加心肌梗死交界區(qū)毛細(xì)血管的密度,改善心肌梗死大鼠的心功能,因此,粒細(xì)胞集落刺激因子用于內(nèi)皮前體細(xì)胞動(dòng)員治療急性心肌梗死在臨床上是有應(yīng)用前景的。 4.咪唑安定能夠加強(qiáng)粒細(xì)胞集落刺激因子動(dòng)員
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