慢病毒介導hTERT基因轉染骨髓內皮祖細胞對心肌梗死大鼠模型的干預研究.pdf

1、[目的]：
　　探討慢病毒介導人端粒酶逆轉錄酶基因轉染大鼠骨髓內皮祖細胞應用于急性心肌梗死治療的有效性及可行性。
　　[方法]：
　　1.采用密度梯度離心法分離約四周齡SD大鼠(Sprague-Dawley rats)的股骨、脛骨、肱骨骨髓中單核細胞(Mononuclear Cells，MNCs)，應用差速貼壁法培養(yǎng)細胞，EGM-2全能培養(yǎng)基誘導細胞分化。
　　2.光鏡下觀察細胞形態(tài)變化及應用流式分選儀分選出細胞

2、表面標記CD34及KDR均陽性的細胞。
　　3.應用流式細胞儀以CD34+及KDR+作為表面標記，鑒定內皮祖細胞。
　　4.采用構建的eGFP標記慢病毒載體，以最佳感染復數(shù)(MOI)值為100進行慢病毒介導目的基因轉染內皮祖細胞。采用熒光相差顯微鏡觀察細胞的轉染率及采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測內皮祖細胞內hTERT mRNA的表達。
　　5.急性心肌梗死大鼠模型的構建。
　　6.HE染色法檢測移

3、植細胞后梗死灶血管新生情況。
　　7.檢測經慢病毒介導人端粒酶逆轉錄酶基因轉染的內皮祖細胞移植于梗死灶1個月后左室心功能。
　　[結論]
　　1.倒置相差顯微鏡下可見細胞形態(tài)的改變。剛提取的EPCs呈圓形，4d開始出現(xiàn)少量梭形細胞，7d時大部分細胞呈梭形，并呈集落樣生長。14d時頭尾相接，呈線索樣或毛細血管網樣，或呈典型的“鋪路石”形態(tài)。
　　2.采用流式細胞分選儀分選細胞表面標記CD34及KDR均陽性的細胞為我

4、們實驗所需目的細胞且能提高EPCs的純度。
　　3.HE染色法檢測發(fā)現(xiàn)移植經慢病毒介導hTERT基因轉染的EPCs的心肌再生血管密度較EPCs組大，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　4 hTERT基因組較EPCs組，其左室心功能得到增強，且差異具有統(tǒng)計學意義。
　　[結果]：
　　1.倒置相差顯微鏡下可見細胞形態(tài)的改變。剛提取的EPCs呈圓形，4d開始出現(xiàn)少量梭形細胞，7d時大部分細胞呈梭形，并呈集落樣生長。14 d時頭

5、尾相接，呈線索樣或毛細血管網樣，或呈典型的“鋪路石”形態(tài)。
　　2.采用流式細胞分選儀分選細胞表面標記CD34及KDR均陽性的細胞均我們實驗所需目的細胞且能提高EPCs的純度。
　　3.HE染色法檢測發(fā)現(xiàn)移植經慢病毒介導hTERT基因轉染的EPCs的心肌再生血管密度較EPCs組大，且差異有統(tǒng)計學意義。
　　4 hTERT基因組較EPCs組，其左室心功能得到增強，且差異具有統(tǒng)計學意義。
　　[結論]：
　　1