雷公藤紅素對CIA小鼠骨髓微環(huán)境中RANKL表達的影響研究.pdf

1、目的：探討雷公藤紅素對膠原誘導關節(jié)炎模型鼠(Collagen-induced arthritis，CIA)中核因子-κb受體活化因子配體(Receptor Activator for Nuclear Factor-κ BLigand，RANKL)在骨髓微環(huán)境的變化影響。
　　方法：建立膠原誘導關節(jié)炎(CIA)小鼠模型，觀察高、中、低不同濃度Cel對CIA小鼠的治療作用及RANKL在骨髓微環(huán)境的影響。主要包括:1.通過構建CIA小鼠

2、模型，觀察CIA小鼠發(fā)病過程;通過流式細胞術檢測正常期小鼠及CIA小鼠未發(fā)病期、發(fā)病前期、病情高峰期、病情緩解期骨髓微環(huán)境變化;通過提取正常期小鼠及CIA組小鼠未發(fā)病期、發(fā)病前期、病情高峰期、病情緩解期骨髓，加入不同濃度RANKL進行原代骨髓破骨細胞誘導，探究不同時期CIA小鼠在不同時期骨髓向破骨細胞分化能力的改變;2.通過小鼠關節(jié)炎評分，觀察CIA組及高、中、低CIA+Cel組小鼠發(fā)病情況;通過流式細胞術檢測CIA組及高、中、低CIA

3、+Cel組小鼠骨髓微環(huán)境中的變化;通過提取CIA組小鼠及高、中、低CIA+Cel組骨髓，加入不同濃度RANKL進行原代骨髓破骨細胞誘導，探究Cel對CIA小鼠骨髓破骨細胞分化影響。
　　結果：CIA小鼠于一次免疫后28天開始陸續(xù)出現(xiàn)關節(jié)紅腫，直至一次免疫后35天達到高峰，病情高峰期約維持3-7天，此后關節(jié)紅腫陸續(xù)消退，直至一次免疫后60天CIA小鼠無明顯關節(jié)紅腫;骨髓流式細胞術結果表明，RANKL在發(fā)病前期在骨髓淋巴細胞群、T細胞

4、、B細胞、單核細胞表達比例達到最高，在病情高峰期及病情緩解期出現(xiàn)下降，在病情緩解期時，RANKL在漿細胞中比例上升;破骨細胞誘導結果表示，CIA模型鼠骨髓細胞在發(fā)病前期、病情高峰期、病情緩解期時可以在較低濃度RANKL條件下向破骨細胞分化。動物模型關節(jié)炎評分顯示，高、中、低CIA+Cel組小鼠關節(jié)炎評分均低于CIA組;與CIA組相比，不同濃度Cel能均能降低RANKL在骨髓淋巴細胞、B細胞、T細胞中的表達。在CIA+Cel中劑量、高劑量

5、組小鼠骨髓中，RANKL在單核細胞的比例降低。CIA+Cel低劑量、中劑量組對RANKL在骨髓漿細胞中表達作用較小，但Cel高劑量組可以增加RANKL在骨髓粒細胞中的表達。
　　結論：⑴在CIA小鼠發(fā)病過程中，骨髓微環(huán)境改變的發(fā)生早于病情改變。RANKL主要在CIA小鼠骨髓淋巴群、T細胞、B細胞中比例明顯升高，暗示了類風濕關節(jié)炎骨髓微環(huán)境的改變早于關節(jié)外表現(xiàn)。⑵Cel能夠在CIA小鼠發(fā)病前期降低RANKL在CIA小鼠骨髓淋巴細胞群