雷公藤內酯醇對AD細胞模型海馬神經元突觸素表達的影響.pdf

1、目的:
　　 通過觀察雷公藤內酯醇(triptolide,TP)對阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)細胞模型海馬神經元突觸素表達的影響,以探討雷公藤內酯醇對AD的作用機制,為臨床上尋找防治AD的有效中藥提供實驗依據。
　　 方法:
　　 選擇合適濃度的AD1-40作用于小膠質細胞建立AD損傷的細胞模型,加入不同劑量的雷公藤內酯醇制備成四組小膠質細胞條件培養(yǎng)液(microglialcond

2、itioned medium,MCM)。不同組MCM干預的海馬神經元分為正常對照組、正常MCM組、模型MCM組、低劑量用藥MCM組、高劑量用藥MCM組等五組,進行下列實驗:
　　 1.免疫細胞化學染色檢測各組海馬神經元在不同時程(2h、24h)突觸素免疫反應陽性產物表達的變化。
　　 2.Western blot檢測各組海馬神經元在不同時程(2h、24h)突觸素蛋白表達的變化。
　　 3.RT-PCR檢測各組海馬

3、神經元在不同時程(2h、24h)突觸素mRNA表達的變化。
　　 結果:
　　 1、免疫細胞化學染色結果顯示:
　　 (1)加入MCM的海馬神經元培養(yǎng)2h后,模型MCM組突觸素累積光密度(integrated optical density,IOD)略低于正常對照組,其他各組突觸素的表達沒有明顯的差異。
　　 (2)加入MCM的海馬神經元培養(yǎng)24h后,模型MCM組突觸素IOD值相對于正常對照組顯著降低；低

4、劑量用藥MCM組突觸素IOD值與模型MCM組比較顯著增高,但仍低于正常對照組；高劑量用藥MCM組IOD值雖與正常對照組相比較仍有降低,但與模型MCM組比較顯著增高,與低劑量用藥MCM組相比較也有明顯的增高。
　　 2、Western blot結果顯示:各組海馬神經元培養(yǎng)2h后,突觸素的表達量除模型MCM組有下降,其他各組無明顯差別。各組海馬神經元培養(yǎng)24h后,模型MCM組明顯下降；低劑量用藥MCM組突觸素的表達量雖低于正常對照組

5、但與模型MCM組比較顯著增高；高劑量用藥MCM組突觸素生長素雖與正常對照組相比較仍有降低,但與模型MCM組比較顯著增高,與低劑量用藥MCM組相比較也有明顯的增高。
　　 3、RT-PCR檢測結果顯示:加藥后2小時各組海馬神經元之間突觸素mRNA表達水平無明顯差異。加藥后24小時,模型MCM組突觸素。mRNA水平相對于正常對照組顯著降低；低劑量用藥MCM組突觸素mRNA水平與模型組比較顯著增高,但仍低于正常對照組；高劑量用藥MCM