機械噴射式霧化機對質(zhì)粒DNA完整性的影響及保護性研究.pdf

1、背景：基因治療在未來的疾病治療中有著極大的發(fā)展?jié)摿?。在呼吸道霧化基因藥物治療中，存在多種制約因素，諸如基因轉(zhuǎn)染過程中的質(zhì)粒大小、載體類型、載體對質(zhì)粒的修飾效果，以及霧化機對基因藥物的破壞等均制約著基因?qū)C體轉(zhuǎn)染的效率。其中，霧化過程中霧化設(shè)備產(chǎn)生的流體剪切力對質(zhì)粒DNA完整性的破壞，對基因藥物轉(zhuǎn)染治療效果起著至關(guān)重要的作用。已應(yīng)用于基因霧化實驗的霧化設(shè)備有靜電噴射式霧化機、機械振蕩霧化機、超聲霧化機及噴射式霧化機。在這四種霧化設(shè)備中，靜

2、電噴射式霧化機尚處于實驗室研發(fā)階段，機械振蕩霧化機為新一代霧化機，使用尚未普及，且價格昂貴。迄今為止臨床應(yīng)用最為廣泛的霧化機即機械噴射式霧化機。本文旨在探討機械噴射式霧化機對質(zhì)粒DNA的破壞程度與霧化時間、霧化劑量之間的關(guān)系，并且觀察在這一過程中高分子聚合物對DNA完整性的保護效果，為未來可能到來的肺部基因治療打下基礎(chǔ)。
　　目的：探索目前臨床廣泛使用的噴射式霧化機對質(zhì)粒DNA(pDNA)完整性破壞的影響及保護措施。
　　方

3、法：在研究霧化時間對pDNA完整性影響的實驗中，加入5mlpDNA(20μg/ml)，分別在開始霧化后收集第1min內(nèi)；第2min內(nèi)；第3min內(nèi)；第4min內(nèi)；第5min內(nèi)及第10min內(nèi)霧化器噴口處的霧化液滴；在研究加樣量對裸pDNA完整性影響的實驗中，分別取2ml、4ml、6ml、8ml，各霧化4min，收集最后一分鐘內(nèi)霧化液滴。在兩種高分子聚合物對pDNA保護性研究的實驗中，各取4ml未經(jīng)高分子聚合物修飾的以及經(jīng)過聚乙烯亞胺(p

4、olyethylenimine,PEI)或陽離子脂質(zhì)體修飾后的pDNA，分別霧化10min，收集最后一分鐘內(nèi)霧化液滴。使用瓊脂糖凝膠電泳分析霧化樣本質(zhì)粒完整性。
　　結(jié)果：在霧化時間由1min增至10min后完整性部分所占百分比由(83.5±2.2)％降至(37.1±2.8)％；加樣量由2ml增至8ml后，pDNA完整性部分所占百分比由(32.1±3.5)％增至(93.6±0.6)％；經(jīng)過PEI或陽離子脂質(zhì)體修飾后的pDNA在霧化