機(jī)械噴射式霧化機(jī)對(duì)質(zhì)粒DNA完整性的影響及保護(hù)性研究.pdf

1、背景：基因治療在未來(lái)的疾病治療中有著極大的發(fā)展?jié)摿ΑＴ诤粑漓F化基因藥物治療中，存在多種制約因素，諸如基因轉(zhuǎn)染過(guò)程中的質(zhì)粒大小、載體類型、載體對(duì)質(zhì)粒的修飾效果，以及霧化機(jī)對(duì)基因藥物的破壞等均制約著基因?qū)C(jī)體轉(zhuǎn)染的效率。其中，霧化過(guò)程中霧化設(shè)備產(chǎn)生的流體剪切力對(duì)質(zhì)粒DNA完整性的破壞，對(duì)基因藥物轉(zhuǎn)染治療效果起著至關(guān)重要的作用。已應(yīng)用于基因霧化實(shí)驗(yàn)的霧化設(shè)備有靜電噴射式霧化機(jī)、機(jī)械振蕩?kù)F化機(jī)、超聲霧化機(jī)及噴射式霧化機(jī)。在這四種霧化設(shè)備中，靜

2、電噴射式霧化機(jī)尚處于實(shí)驗(yàn)室研發(fā)階段，機(jī)械振蕩?kù)F化機(jī)為新一代霧化機(jī)，使用尚未普及，且價(jià)格昂貴。迄今為止臨床應(yīng)用最為廣泛的霧化機(jī)即機(jī)械噴射式霧化機(jī)。本文旨在探討機(jī)械噴射式霧化機(jī)對(duì)質(zhì)粒DNA的破壞程度與霧化時(shí)間、霧化劑量之間的關(guān)系，并且觀察在這一過(guò)程中高分子聚合物對(duì)DNA完整性的保護(hù)效果，為未來(lái)可能到來(lái)的肺部基因治療打下基礎(chǔ)。
　　目的：探索目前臨床廣泛使用的噴射式霧化機(jī)對(duì)質(zhì)粒DNA(pDNA)完整性破壞的影響及保護(hù)措施。
　　方

3、法：在研究霧化時(shí)間對(duì)pDNA完整性影響的實(shí)驗(yàn)中，加入5mlpDNA(20μg/ml)，分別在開始霧化后收集第1min內(nèi)；第2min內(nèi)；第3min內(nèi)；第4min內(nèi)；第5min內(nèi)及第10min內(nèi)霧化器噴口處的霧化液滴；在研究加樣量對(duì)裸pDNA完整性影響的實(shí)驗(yàn)中，分別取2ml、4ml、6ml、8ml，各霧化4min，收集最后一分鐘內(nèi)霧化液滴。在兩種高分子聚合物對(duì)pDNA保護(hù)性研究的實(shí)驗(yàn)中，各取4ml未經(jīng)高分子聚合物修飾的以及經(jīng)過(guò)聚乙烯亞胺(p

4、olyethylenimine,PEI)或陽(yáng)離子脂質(zhì)體修飾后的pDNA，分別霧化10min，收集最后一分鐘內(nèi)霧化液滴。使用瓊脂糖凝膠電泳分析霧化樣本質(zhì)粒完整性。
　　結(jié)果：在霧化時(shí)間由1min增至10min后完整性部分所占百分比由(83.5±2.2)％降至(37.1±2.8)％；加樣量由2ml增至8ml后，pDNA完整性部分所占百分比由(32.1±3.5)％增至(93.6±0.6)％；經(jīng)過(guò)PEI或陽(yáng)離子脂質(zhì)體修飾后的pDNA在霧化