不同質(zhì)量精子線(xiàn)粒體DNA拷貝數(shù)及完整性的比較研究.pdf

1、【背景】目前全世界有10％-15%的夫婦受到不孕不育的困擾,其中40%-50%是由于男方因素引起,全球范圍男子生殖能力呈明顯下降趨勢(shì)。導(dǎo)致男性不育的病因十分復(fù)雜,生育相關(guān)基因的缺陷是重要原因之一。線(xiàn)粒體是精子中唯一的細(xì)胞器,經(jīng)典的理論認(rèn)為線(xiàn)粒體通過(guò)氧化磷酸化產(chǎn)生三磷酸腺苷( adenosine triphosphate,ATP)供給精子能量。雖然線(xiàn)粒體產(chǎn)能對(duì)精子運(yùn)動(dòng)和功能的重要性還存爭(zhēng)議,但在異常精液中確實(shí)發(fā)現(xiàn)了精子線(xiàn)粒體DNA(mit

2、ochondrial DNA,mtDNA)的突變、缺失及精子結(jié)構(gòu)的異常。近年來(lái),關(guān)于精子mtDNA的研究引起人們的廣泛關(guān)注,但研究主要集中在基因的突變與缺失上,拷貝數(shù)的研究較少,不過(guò)也有學(xué)者提出可以通過(guò)測(cè)定mtDNA的拷貝數(shù)評(píng)估線(xiàn)粒體的功能狀態(tài)。
　　【目的】本研究的目的是通過(guò)比較不同質(zhì)量精子mtDNA拷貝數(shù)及完整性差異,探討精子mtDNA拷貝數(shù)和完整性與精子質(zhì)量的關(guān)系,以及精子mtDNA對(duì)男性生育能力的影響。
　　【方法】

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction, Real-time PCR)技術(shù)是一項(xiàng)已經(jīng)發(fā)展成熟的研究手段,廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)研究領(lǐng)域,具有快速、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn),能定量檢測(cè)目的基因拷貝數(shù)及表達(dá)量的變化。本實(shí)驗(yàn)采用Percoll非連續(xù)密度梯度離心法將精液樣本分為30%層精子和80%層精子,應(yīng)用Real-time PCR技術(shù)定量分析不同質(zhì)量精子各層mt

4、DNA拷貝數(shù)。同時(shí)應(yīng)用長(zhǎng)鏈PCR技術(shù)測(cè)定不同質(zhì)量精子80%層mtDNA完整性。
　　【結(jié)果】52例精液樣本中,正常組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(4.85±3.00)與其80%層精子(0.80±0.45)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);弱精子癥組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(1.92±1.29)與其80%層精子(0.70±0.52)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);少精子癥組30%層精子mtDNA拷貝數(shù)(13.33±

5、9.96)與其80%層精子(1.52±0.68)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);少弱精子癥組30%層精子 mtDNA拷貝數(shù)(5.34±4.62)與其80%層精子(1.93±0.65)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在80%層精子中,少精子癥組(1.52±0.68)與少弱精子癥組(1.93±0.65)mtDNA拷貝數(shù)與正常組(0.80±0.45)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);少弱精子癥組(9.33±2.71)mt

6、DNA完整性與正常組(27.01±17.36)、弱精子癥組(32.36±21.75)及少精子癥組(17.63±7.64)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。在30%層精子中,少精子癥組(13.33±9.96)和弱精子癥組(1.92±1.29) mtDNA拷貝數(shù)與正常組(4.85±3.00)比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。比較80%層精子各參數(shù)相關(guān)性, mtDNA拷貝數(shù)與 mtDNA完整性呈負(fù)相關(guān)(r=-0.6261,P<0.