銀杏葉提取物防治哮喘小鼠氣道重塑機(jī)制的研究.pdf

1、氣道重塑（Remodeling）又稱氣道重建或氣道重構(gòu)，是慢性哮喘反復(fù)發(fā)作的重要病理生理基礎(chǔ)，它與哮喘肺功能損害及氣道高反應(yīng)性密切相關(guān)。細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)的降解和沉積失衡是導(dǎo)致氣道壁結(jié)構(gòu)異常、肺實(shí)質(zhì)破壞及間質(zhì)增生的重要原因，ECM主要由基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinase，MMPs）來(lái)降解,其中基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase9,

2、MMP-9）是鋅依賴性蛋白酶，基質(zhì)金屬蛋白酶-9催化集團(tuán)區(qū)含有3個(gè)重復(fù)的類Ⅱ型纖維連接蛋白結(jié)合區(qū)，決定了它對(duì)明膠和彈力纖維的底物特異性，主要降解Ⅳ型以及Ⅴ型膠原。近來(lái)研究表明MMP-9在支氣管哮喘患者的氣道炎癥和組織重塑中發(fā)揮重要作用。核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是一種多功能核轉(zhuǎn)錄因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，不僅參與哮喘的炎癥反應(yīng)，還參與哮喘氣道的重塑過程。研究表明血小板活化因子（Platel

3、et-activatingFactor,PAF）是NF-κB特異激活因子，PAF通過早期激活NF-κB來(lái)導(dǎo)致各種炎癥反應(yīng)。銀杏葉提取物是PAF的特異性抑制因子。研究證明MMP-9是NF-κB的靶因子，NF-κB增加可直接導(dǎo)致MMP-9表達(dá)的升高，但是，目前尚未有研究證明PAF是否通過影響NF-κB來(lái)影響MMP-9表達(dá)。因此，本研究分為兩部分，探索銀杏葉提取物對(duì)慢性哮喘小鼠表達(dá)MMP-9的影響及銀杏葉提取物是否是通過抑制NF-κB的表達(dá)而

4、影響MMP-9的表達(dá)。
　　第一部分:
　　目的:探索銀杏葉提取物對(duì)慢性哮喘小鼠表達(dá)MMP-9的影響。
　　方法:建立哮喘小鼠氣道重塑模型，40只BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為4組：對(duì)照組，哮喘組，銀杏葉干預(yù)組，地塞米松干預(yù)組。以雞卵清蛋白（ovalbumin，OVA）致敏并激發(fā)制備小鼠慢性哮喘模型。對(duì)肺組織切片行蘇木精-伊紅染色觀察氣道重塑情況。免疫組化測(cè)各組小鼠肺組織MMP-9的表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)各組小鼠肺組

5、織MMP-9mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:哮喘組動(dòng)物出現(xiàn)管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等氣道重塑的特征性改變,免疫組化染色顯示氣道各層細(xì)胞及炎性細(xì)胞均有MMP-9表達(dá)的增多，且MMP-9mRNA水平也顯著增高。地塞米松干預(yù)組和銀杏葉干預(yù)組與哮喘組比較,炎癥反應(yīng)輕微,平滑肌增生、粘液分泌不明顯,免疫組化染色示各細(xì)胞MMP-9表達(dá)也有所降低，MMP-9mRNA水平表達(dá)降低,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：長(zhǎng)期吸入變應(yīng)原

6、可導(dǎo)致氣道重塑，MMP-9在氣道重塑中發(fā)揮了作用，銀杏葉的干預(yù)作用說明在PAF和MMP-9之間可能存在某種聯(lián)系。
　　第二部分:
　　目的:探索銀杏葉提取物對(duì)慢性哮喘小鼠表達(dá)NF-κB的影響及其與MMP-9表達(dá)的關(guān)系
　　方法:建立哮喘小鼠氣道重塑模型，40只BALB/c小鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為4組：對(duì)照組，哮喘組，銀杏葉干預(yù)組，地塞米松干預(yù)組。以O(shè)VA致敏并激發(fā)制備小鼠慢性哮喘模型。對(duì)肺組織切片行蘇木精-伊紅染色觀察氣道

7、重塑情況。免疫組化測(cè)各組小鼠肺組織NF-κB的表達(dá)。RT-PCR檢測(cè)各組小鼠肺組織NF-κBmRNA表達(dá)。作NF-κB活化與MMP-9表達(dá)的相關(guān)關(guān)系分析。
　　結(jié)果:哮喘組動(dòng)物出現(xiàn)管壁增厚、平滑肌增生、黏液分泌增加等氣道重塑的特征性改變,免疫組化染色顯示NF-κB明顯活化，且NF-κBmRNA水平也顯著增高。地塞米松干預(yù)組和銀杏葉干預(yù)組與哮喘組比較,炎癥反應(yīng)輕微,平滑肌增生、粘液分泌不明顯,免疫組化染色示NF-κB活化也有所降低，