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1、目的:觀察銀杏葉提取物(extract of ginkgo biloba,GBE)對(duì)大鼠糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)的防治作用并探討其作用機(jī)制。 方法:雄性SD大鼠隨機(jī)取14只為正常組,其余一次性腹腔注射鏈脲霉素(streptozotocin,STZ)60 mg/kg誘導(dǎo)糖尿病模型。成模的糖尿病大鼠分為5組:DN病理組;GBE低劑量治療組(GL組,劑量為50 mg/kg);GBE中劑量治療組(GM
2、組,劑量為100 mg/kg);GBE高劑量治療組(GH組,劑量為200 mg/kg);卡托普利對(duì)照組(劑量為10 mg/kg),療程12周。葡萄糖氧化酶法測(cè)定空腹血糖;親和層析法測(cè)定糖化血紅蛋白(glycosylated hemoglobin,HbAlC);化學(xué)比色法測(cè)定24 h尿蛋白、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr);熒光分光光度法測(cè)定腎皮質(zhì)和血清中糖基化終末產(chǎn)物(adv
3、anced glycosylation end products,AGEs)含量;可見(jiàn)光分光光度法測(cè)定抗氧化指標(biāo)的水平;DL-甘油醛-NADPH-熒光分光光度法測(cè)定醛糖還原酶(aldose reductase,AR)活性;放免法測(cè)定腎皮質(zhì)中Ⅳ型膠原和層粘蛋白含量;免疫組織化學(xué)法測(cè)定腎皮質(zhì)中基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)、金屬蛋白酶抑制劑-2(tissue inhibitor of
4、 metalloproteinase-2,TIMP-2)、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor,CTGF)的表達(dá)水平;RT-PCR法測(cè)定腎皮質(zhì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA的相對(duì)含量;光鏡和電鏡分別觀察大鼠腎臟組織形態(tài)學(xué)變化并測(cè)定基底膜厚度。 結(jié)果:中高劑量GBE能明顯改善DN大鼠多飲多尿的癥狀;有效降低空腹血糖、H
5、bAlC、24 h尿蛋白、BUN、Cr和腎臟指數(shù);升高DN大鼠T-AOC、CAT本課題受江蘇省高校自然科研基金資助(No.03KJ13360143)活性、T-SOD和GSH-Px水平;顯著抑制DN大鼠的AR活性;降低腎皮質(zhì)和血清中AGEs含量;降低腎皮質(zhì)中Ⅳ型膠原和層粘蛋白含量;顯著降低TIMP-2和CTGF的表達(dá)以及升高M(jìn)MP-2的水平;明顯減少腎皮質(zhì)TGF-β1 mRNA的相對(duì)含量;減小DN大鼠腎臟基底膜厚度。光鏡結(jié)果顯示,GBE可
6、改善DN大鼠GBM增厚、系膜增生、PAS陽(yáng)性紅染增多,球體毛細(xì)血管閉塞等腎組織形態(tài)學(xué)上的異常。電鏡顯示,GBE使DN大鼠腎小球毛細(xì)血管基底膜平滑,厚度基本均一;系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生程度減輕。 結(jié)論: GBE可能通過(guò)降低血糖、抑制AGEs產(chǎn)生、抗氧化應(yīng)激、降低TGF-β1水平、降低TIMP-2、CTGF和升高M(jìn)MP-2的表達(dá),抑制AR活性,改善DN產(chǎn)生的蛋白尿、HbAlC升高、腎功能異常、腎小球系膜外基質(zhì)增生和GBM增厚等諸多變化,
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