2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩74頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)感染嚴重影響著全球公共健康,全世界大約有17億HCV感染者。HCV感染者中,約有80%發(fā)展為慢性丙型肝炎,至少有30%的HCV攜帶者發(fā)展成為更嚴重的肝病,如脂肪肝、肝硬化和肝癌。
  HCV屬于黃病毒家族中的肝病毒類,其病毒顆粒由一個9.6kb的正性的單鏈RNA片段包裝折疊而成。其基因編碼區(qū)的閱讀框在翻譯后可形成一個由3000個氨基酸組成的蛋白單體。此蛋白單體在翻譯后可黏附于內(nèi)

2、質(zhì)網(wǎng)膜上,并在宿主和病毒的蛋白酶的作用下轉(zhuǎn)化為3個結(jié)構(gòu)蛋白(core蛋白、E1、E2)和7個非結(jié)構(gòu)蛋白(p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)。HCV可以分為7個主基因型和多個亞型。蛋白單體還可與細胞表面的特異性蛋白綁定,通過網(wǎng)格蛋白的內(nèi)吞作用內(nèi)化,從而啟動生命周期。
  HCVcore蛋白是22kDa的非糖基化蛋白,由靠近5`端的開放讀碼框編碼。作為典型的黃病毒core蛋白,它富含賴氨酸和精氨酸(N端更明

3、顯))。它與RNA基因組結(jié)合而形成HCV病毒核衣殼。HCVcore蛋白的亞細胞定位在細胞質(zhì)。但當其C端缺失時,可向核內(nèi)遷移。這表明HCVcore蛋白可能在HCV致病過程中其到直接而關(guān)鍵的作用。
  長期慢性的HCV感染者體內(nèi)的HCV能夠影響肝細胞內(nèi)脂類代謝,從而導致脂滴在肝臟中的積聚。同時,肝細胞內(nèi)的脂滴在HCV生命循環(huán)中也發(fā)揮著非常重要的作用。
  HCV誘發(fā)脂肪肝、肝硬化最終形成肝癌的機理尚未闡明。普遍認為,HCV通過影

4、響宿主肝細胞的脂代謝,誘發(fā)脂肪肝,并逐漸發(fā)展為肝硬化、肝癌。HCV誘發(fā)脂肪肝很可能與HCV蛋白和細胞脂代謝相關(guān)蛋白之間的相互作用有關(guān)。其中HCV的core蛋白是重要的致病因素,它涉及到脂滴累積,脂肪基因表達的改變和脂肪相關(guān)蛋白的活性。宿主基因表達對病毒生命周期有協(xié)助作用。長期肝脂肪變的存在可加速肝硬化和肝癌的進程。
  異常的脂代謝能夠加速肝病發(fā)展,而脂滴分子在HCV復制的過程中又發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究HCVcore蛋白誘發(fā)脂肪肝的

5、分子機制就顯得尤為重要。通過闡明HCVcore蛋白誘發(fā)脂肪肝的致病機理,控制感染,抑制脂肪肝的形成,并預防疾病進一步惡化,是目前世界上研究的熱點問題。
  值得注意的是,HCVcore蛋白3a亞型與其他亞型相比,能夠更加強烈地誘導肝臟脂肪變的形成,但其基因序列與其他亞型相比,只在數(shù)量極少的若干個堿基上有差異??赏茰y這些差異堿基中具有與肝脂肪變相關(guān)的重要序列,但其通過何種機制發(fā)揮作用尚不明了。
  本研究著眼于HCVcore蛋

6、白3a亞型(HCVcore3a)誘發(fā)肝臟脂肪變的分子機制。我們構(gòu)建了攜帶HA-HCVcore3a基因的重組腺病毒,以攜帶HA-HCVcore1b基因的重組腺病毒作對照,感染原位灌注分離的小鼠原代肝細胞。在感染24h,48h,72h時間點,分別觀察感染HCVcore3a與HCVcore1b和正常肝細胞中脂滴的形成大小,數(shù)量等形態(tài)學特點。
  PPAR-α是細胞核激素受體超家族的一員,是正常脂肪細胞分化過程中所必需的。核轉(zhuǎn)錄因子PPA

7、R-α的主要功能是控制脂肪酸氧化和活化作用。PPAR-α缺乏會導致肝臟中脂肪酸氧化缺陷。因此,我們通過反轉(zhuǎn)錄和實時定量PCR技術(shù),檢測與脂代謝相關(guān)的宿主細胞受體PPAR-α和宿主基因ACC1和FAS的mRNA的表達量的變化,從而進一步探究HCVcore蛋白誘導肝臟脂肪變的分子機制。
  【目的】
  1.研究HCVcore3a蛋白在小鼠原代肝細胞中表達時誘導脂滴形成的大小,數(shù)量等形態(tài)指標;
  2.通過實時定量PCR技

8、術(shù)檢測宿主細胞受體PPAR-α,宿主基因ACC1和FAS的mRNA的表達量,研究HCVcore蛋白與宿主細胞脂代謝之間的關(guān)系。
  【方法】
  1.構(gòu)建攜帶HA-HCVcore3a和HA-HCVcore1b融合基因的重組腺病毒;
  2.通過原位灌注分離小鼠原代肝細胞培養(yǎng),并制作細胞爬片;
  3.用攜帶融合基因HA-HCVcore3a和HA-HCVcore1b的重組腺病毒感染小鼠原代肝細胞;
  4.在

9、24h,48h,72h的時間點分別對原代肝細胞進行免疫熒光檢測,觀察原代肝細胞中脂滴形成的大小,數(shù)量等形態(tài)學特點;
  5.培養(yǎng)小鼠肝細胞系A(chǔ)ML12,并進行重組腺病毒的感染;
  6.反轉(zhuǎn)錄受感染細胞中的mRNA為cDNA,進行實時定量PCR檢測,以探究HCVcore蛋白在肝細胞內(nèi)誘導脂肪變的分子機制。
  【結(jié)果】
  1.成功構(gòu)建pAdEasy-HA-HCVcore3a和pAdEasy-HA-HCVcore

10、1b重組腺病毒。
  首先將全基因合成的HCVcore3a(1b)片段連入pCMV-HA載體中,并將HA-HCVcore3a(1b)片段整體轉(zhuǎn)入穿梭質(zhì)粒pshuttle-CMV中。利用穿梭質(zhì)粒同源重組獲得重組腺病毒質(zhì)粒,經(jīng)腺病毒包裝和擴增獲得高滴度的重組腺病毒。利用westernblot技術(shù)檢測融合蛋白鑒定重組腺病毒包裝成功。
  2.相對于HCVcore1b,感染HCVcore3a重組腺病毒的小鼠原代肝細胞形成的脂滴增大,

11、數(shù)量增加。
  用pAdEasy-HA-HCVcore3a和pAdEasy-HA-HCVcore1b重組腺病毒感染小鼠原代肝細胞24h,48h,72h。結(jié)果顯示,pAdEasy-HA-HCVcore3a與pAdEasy-HA-HCVcore1b感染相比,前者能夠誘導形成體積較大的脂滴,并且脂滴數(shù)量明顯增加。HCVcore1b與正常肝細胞相比也能誘導數(shù)量較少的脂肪變。
  3.感染pAdEasy-HA-HCVcore3a重組腺

12、病毒的小鼠肝細胞中PPAR-α的mRNA的表達量明顯低于pAdEasy-HA-HCVcore1b感染的肝細胞以及正常原代肝細胞,同時ACC1表達量有所升高,但FAS的表達量變化不明顯。
  用pAdEasy-HA-HCVcore3a和pAdEasy-HA-HCVcore1b分別感染小鼠肝細胞系A(chǔ)ML12。24h后利用實時定量PCR技術(shù)檢測PPAR-α,ACC1和FAS的mRNA含量。發(fā)現(xiàn)3a亞型感染與1b亞型感染和正常細胞相比,P

13、PAR-α的表達量明顯降低。而ACC1表達量有所升高,但亞型之間相差不大,而FAS的mRNA的表達量變化不大。
  【結(jié)論】本研究發(fā)現(xiàn)HCVcore3a在細胞水平上誘導肝臟細胞脂肪變的作用比HCVcore1b更強。在脂滴大小和數(shù)量上都可以明顯地看出此趨勢,其中HCVcore3a組脂滴大小為HCVcore1b組脂滴大小的4~6倍。HCVcore蛋白可能通過降低宿主細胞PPAR-α等相關(guān)蛋白的表達量發(fā)生作用,誘導脂滴形成,誘發(fā)肝臟脂肪

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論