慢性HCV感染患者認(rèn)知功能研究及其機(jī)制初步探討.pdf

1、目的：通過本研究擬了解：1.慢性HCV感染患者與慢性HBV病毒感染患者、正常對(duì)照間認(rèn)知功能的差異，明確慢性HCV感染患者認(rèn)知功能損害的程度和模式；以及與慢性HBV感染患者比較，認(rèn)知功能損害是否為慢性HCV感染患者的獨(dú)特特征。2.慢性HCV感染患者的認(rèn)知功能與抑郁癥狀的關(guān)系。3.設(shè)計(jì)并建立巢式熒光定量PCR（Nested-qRT-PCR）檢測(cè)慢性丙型病毒感染患者CSF中HCV5'NCR基因片段，進(jìn)一步證實(shí)慢性HCV感染患者的CSF中是否存

2、在HCV感染。4.初步探討HCV對(duì)CNS的直接感染是否與慢性HCV感染患者認(rèn)知功能的損害有關(guān)。 方法： 1、采用目前較為常用的神經(jīng)心理測(cè)驗(yàn)工具對(duì)36例輕度慢性HCV感染患者、32例慢性HBV病毒感染患者及28例對(duì)照者進(jìn)行測(cè)驗(yàn)，各組還采用Beck抑郁自評(píng)量表（BDI-Ⅱ）進(jìn)行抑郁癥狀的評(píng)定。 2、根據(jù)GenBank提供的基因序列，針對(duì)HCV基因的保守區(qū)域（HCV5'NCR基因），設(shè)計(jì)并合成特異性內(nèi)外引物和熒光標(biāo)記T

3、aqMan探針。從重慶醫(yī)科大學(xué)病毒性肝炎研究所惠贈(zèng)的含有目的基因的質(zhì)粒出發(fā)，利用PCR方法擴(kuò)增獲得目的基因，克隆至pGEM-T Easy載體進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄，將得到的RNA純化并使用RiboGreen方法進(jìn)行定量后作為陽性標(biāo)準(zhǔn)品。分別建立正鏈和負(fù)鏈HCV RNA的巢式熒光定量RT-PCR方法并分析敏感性和特異性。 3、應(yīng)用Nested-qRT-PCR方法檢測(cè)12例慢性丙型肝炎病毒感染患者外周血液?jiǎn)蝹€(gè)核細(xì)胞和腦脊液HCV5'NCR基因

4、片段，并對(duì)腦脊液陽性樣本進(jìn)行分子克隆和測(cè)序分析。同時(shí)對(duì)這12例患者進(jìn)行神經(jīng)心理測(cè)驗(yàn)，比較腦脊液HCV陽性者與陰性者的測(cè)驗(yàn)成績(jī)。 結(jié)果： 1、HCV感染患者在反映注意、記憶和言語功能的測(cè)驗(yàn)如數(shù)字符號(hào)、延遲邏輯記憶、言語流暢性測(cè)試重復(fù)數(shù)、連線B測(cè)驗(yàn)（TMT-B）和Stroop測(cè)驗(yàn)上與健康對(duì)照組有差異，尤其在數(shù)字符號(hào)、TMT-B和Stroop-cw測(cè)驗(yàn)上差異顯著，而HBV患者與健康對(duì)照組各項(xiàng)測(cè)驗(yàn)值均無差異。 2、本研究

5、成功建立了正鏈和負(fù)鏈HCV巢式熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法，其最低檢出限即敏感性分別為2.6×102copies/μl、2.6×101copies/μl，標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量范圍分別為2.6×102～2.6×107copies/μl、2.6×101～2.6×107copies/μl，相關(guān)系數(shù)R2分別為0.9883和0.9969，不與其他病毒發(fā)生非特異反應(yīng)。 3、共對(duì)12例慢性丙型肝炎感染患者的PBMCs，腦脊液細(xì)胞中的正鏈和負(fù)鏈HCV

6、 RNA（positive-和negative-strands）進(jìn)行了檢測(cè)，10例PBMCs檢測(cè)5'NCR基因片段為陽性，而其中3例CSF正鏈HCVRNA檢測(cè)陽性（3/12），2例負(fù)鏈HCV RNA檢測(cè)陽性（2/12）。 4、12例慢性丙型肝炎病毒感染患者中腦脊液HCV檢測(cè)陽性者（3例）與腦脊液HCV檢測(cè)陰性者（9例）以及健康對(duì)照組的神經(jīng)心理測(cè)驗(yàn)成績(jī)比較，腦脊液HCV陽性者在數(shù)字符號(hào)和TMT-B測(cè)驗(yàn)上與腦脊液HCV陰性者以及正常

7、對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異。 結(jié)論： 1、慢性HCV患者在需要持續(xù)注意和更復(fù)雜的注意力集中測(cè)試的視覺掃描，以及知覺運(yùn)動(dòng)速度，工作記憶上存在障礙，此認(rèn)知功能損害與抑郁自評(píng)癥狀之間無顯著相關(guān)性。在HBV感染患者中沒有發(fā)現(xiàn)類似的認(rèn)知損害，提示這種認(rèn)知功能損害模式是慢性HCV患者所獨(dú)特的。 2、本研究構(gòu)建了HCV5'NCR基因核酸定量檢測(cè)用的正鏈和負(fù)鏈RNA標(biāo)準(zhǔn)品，并建立了正鏈和負(fù)鏈HCV巢式熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法。該