慢性HCV感染患者認知功能研究及其機制初步探討.pdf

1、目的：通過本研究擬了解：1.慢性HCV感染患者與慢性HBV病毒感染患者、正常對照間認知功能的差異，明確慢性HCV感染患者認知功能損害的程度和模式；以及與慢性HBV感染患者比較，認知功能損害是否為慢性HCV感染患者的獨特特征。2.慢性HCV感染患者的認知功能與抑郁癥狀的關系。3.設計并建立巢式熒光定量PCR（Nested-qRT-PCR）檢測慢性丙型病毒感染患者CSF中HCV5'NCR基因片段，進一步證實慢性HCV感染患者的CSF中是否存

2、在HCV感染。4.初步探討HCV對CNS的直接感染是否與慢性HCV感染患者認知功能的損害有關。 方法： 1、采用目前較為常用的神經心理測驗工具對36例輕度慢性HCV感染患者、32例慢性HBV病毒感染患者及28例對照者進行測驗，各組還采用Beck抑郁自評量表（BDI-Ⅱ）進行抑郁癥狀的評定。 2、根據GenBank提供的基因序列，針對HCV基因的保守區(qū)域（HCV5'NCR基因），設計并合成特異性內外引物和熒光標記T

3、aqMan探針。從重慶醫(yī)科大學病毒性肝炎研究所惠贈的含有目的基因的質粒出發(fā)，利用PCR方法擴增獲得目的基因，克隆至pGEM-T Easy載體進行體外轉錄，將得到的RNA純化并使用RiboGreen方法進行定量后作為陽性標準品。分別建立正鏈和負鏈HCV RNA的巢式熒光定量RT-PCR方法并分析敏感性和特異性。 3、應用Nested-qRT-PCR方法檢測12例慢性丙型肝炎病毒感染患者外周血液單個核細胞和腦脊液HCV5'NCR基因

4、片段，并對腦脊液陽性樣本進行分子克隆和測序分析。同時對這12例患者進行神經心理測驗，比較腦脊液HCV陽性者與陰性者的測驗成績。 結果： 1、HCV感染患者在反映注意、記憶和言語功能的測驗如數字符號、延遲邏輯記憶、言語流暢性測試重復數、連線B測驗（TMT-B）和Stroop測驗上與健康對照組有差異，尤其在數字符號、TMT-B和Stroop-cw測驗上差異顯著，而HBV患者與健康對照組各項測驗值均無差異。 2、本研究

5、成功建立了正鏈和負鏈HCV巢式熒光定量RT-PCR檢測方法，其最低檢出限即敏感性分別為2.6×102copies/μl、2.6×101copies/μl，標準曲線的定量范圍分別為2.6×102～2.6×107copies/μl、2.6×101～2.6×107copies/μl，相關系數R2分別為0.9883和0.9969，不與其他病毒發(fā)生非特異反應。 3、共對12例慢性丙型肝炎感染患者的PBMCs，腦脊液細胞中的正鏈和負鏈HCV

6、 RNA（positive-和negative-strands）進行了檢測，10例PBMCs檢測5'NCR基因片段為陽性，而其中3例CSF正鏈HCVRNA檢測陽性（3/12），2例負鏈HCV RNA檢測陽性（2/12）。 4、12例慢性丙型肝炎病毒感染患者中腦脊液HCV檢測陽性者（3例）與腦脊液HCV檢測陰性者（9例）以及健康對照組的神經心理測驗成績比較，腦脊液HCV陽性者在數字符號和TMT-B測驗上與腦脊液HCV陰性者以及正常

7、對照組有統(tǒng)計學上的差異。 結論： 1、慢性HCV患者在需要持續(xù)注意和更復雜的注意力集中測試的視覺掃描，以及知覺運動速度，工作記憶上存在障礙，此認知功能損害與抑郁自評癥狀之間無顯著相關性。在HBV感染患者中沒有發(fā)現類似的認知損害，提示這種認知功能損害模式是慢性HCV患者所獨特的。 2、本研究構建了HCV5'NCR基因核酸定量檢測用的正鏈和負鏈RNA標準品，并建立了正鏈和負鏈HCV巢式熒光定量RT-PCR檢測方法。該