視黃醇結(jié)合蛋白4與代謝綜合征的相關性研究.pdf

1、目的：觀察脂肪因子視黃醇結(jié)合蛋白4(Retinol-binding protein-4，RBP4)與代謝綜合征的關系，探討它對胰島素抵抗、肥胖以及糖、脂代謝等方面的作用，對代謝綜合征的并發(fā)癥如冠心病、糖尿病等疾病的影響，以及他汀類藥物對RBP4表達水平的調(diào)控作用。
　　 方法：ELISA試劑盒測定血清RBP4在單純冠心病和冠心病合并2型糖尿病患者中的變化，觀察RBP4與體脂、糖、脂代謝及肝功能的關系。建立代謝綜合征大鼠模型，EL

2、ISA法比較兩組血清RBP4水平、IL-6和MDA，Western-blot方法觀察肝臟、附睪脂肪和心肌組織中RBP4的含量變化，RT-PCR方法檢測RBP4、脂聯(lián)素和PPAR-γ mRNA在各個組織的表達變化。體外誘導3T3-L1小鼠前脂肪細胞為脂肪細胞后，Western-blot方法觀察不同濃度和不同時間他汀類藥物辛伐他汀對細胞RBP4表達水平的調(diào)控作用，RT-PCR方法檢查不同組的辛伐他汀對于RBP4、脂聯(lián)素和PPAR-γ mRN

3、A的表達變化。
　　 結(jié)果：冠心病合并2型糖尿病患者血清RBP4升高顯著，單純冠心病患者血清RBP4無明顯升高，腰圍、TG和年齡是RBP4的獨立相關因素。代謝綜合征大鼠的肝臟、附睪脂肪和心肌組織RBP4含量均升高顯著，血清RBP4、IL-6和MDA升高顯著，RBP4mRNA在肝臟、脂肪和心臟組織中均升高，脂聯(lián)素mRNA下降，PPAR-γ mRNA升高。辛伐他汀可以顯著降低3T3-L1誘導的成熟脂肪細胞分泌RBP4。
　　

4、 結(jié)論：RBP4與冠心病可能無顯著相關，與冠心病合并2型糖尿病相關，與血糖、血脂、血壓以及胰島素抵抗有關指標有著不同程度的相關，提示RBP4可能是提示代謝綜合征的一項血清學標志物。代謝綜合征中RBP4與脂聯(lián)素表達相反。辛伐他汀可以顯著降低小鼠脂肪細胞RBP4的表達，可能與PPAR-γ有關。
　　 近年來，代謝綜合征的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，其并發(fā)癥的嚴重性日益升高，對代謝綜合征發(fā)病機制的研究也越來越受到人們的重視。2005年Yan

5、g博士等人發(fā)現(xiàn)了視黃醇(維生素A)結(jié)合蛋白4，不僅是轉(zhuǎn)運維生素A的運載蛋白，還是一種與胰島素抵抗密切相關的脂肪因子，而胰島素抵抗目前來說是代謝綜合征發(fā)病機制的核心因素。動物試驗中發(fā)現(xiàn)RBP4在大鼠肝臟、附睪脂肪、腎臟，心肌和骨骼肌都有表達，在臨床試驗中發(fā)現(xiàn)血清RBP4水平與糖、脂代謝，非酒精性肝硬化等疾病都有關系，但其中具體機制仍然未明確。本次研究以臨床試驗，動物模型和體外細胞試驗三個部分，分布闡述RBP4與代謝綜合征的相關性研究。

6、r>　　 第一部分冠心病患者以及冠心病合并2型糖尿病患者血清視黃醇結(jié)合蛋白4水平的臨床研究
　　 目的：Yang等發(fā)現(xiàn)了一種參與胰島素抵抗發(fā)生的脂肪因子—視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)。臨床試驗證實，在肥胖和2型糖尿病患者中血清RBP4升高明顯。RBP4主要由肝臟合成和分泌，在人體內(nèi)，肝臟、脂肪細胞表達較多，在心臟組織、骨骼肌中表達量較低。RBP4與心肌細胞的相關作用尚未明確，它在人體內(nèi)的病理生理意義仍需進一步的研究。本研究主要

7、通過臨床研究探討：
　　 1、血清RBP4在非冠心病，單純冠心病冠心病患者以及冠心病合并2型糖尿病患者的變化；
　　 2、血清RBP4與體脂、糖、脂代謝及肝功能的關系。
　　 對象與方法：我們?nèi)脒x2009年8月至2010年1月在本院經(jīng)冠脈造影檢查后年齡在40-80歲之間共120例病人，分組如下：非冠心病組(NS)30例，單純冠心病(CHD)(n=45)，冠心病合并糖尿病患者(CHD+DM)(n=45)。測定受試者

8、的體重指數(shù)(BMI)、腰臀比(WHR)、空腹狀態(tài)下血糖(FPG)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、谷草轉(zhuǎn)氨酶()、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)和RBP4。
　　 小結(jié)：
　　 1、冠心病合并2型糖尿病患者的血清RBP4顯著升高，單純冠心病患者血清RBP4未見明顯升高；
　　 2、血清RBP4與WHR，TG，年齡呈正相關；<

9、br>　　 3、 RBP4與血糖、血壓、血脂以及中心型肥胖等與胰島素抵抗有關指標有著不同程度的相關，表明RBP4是提示代謝綜合征的一項血清學標志物；
　　 4、冠心病合并2型糖尿病患者的ALT和AST都較高，其肝臟可能存在不同程度脂質(zhì)沉積，但我們未發(fā)現(xiàn)這組人群的血清RBP4變化與ALT和AST有顯著相關。
　　 第二部分視黃醇結(jié)合蛋白4在代謝綜合征大鼠各組織中的表達以及血清RBP4與其他細胞因子的關系
　　 目

10、的：RBP4在肝臟、脂肪和心肌等多種組織均有合成和分泌。本研究通過高鹽高脂飼養(yǎng)狀態(tài)下形成的代謝綜合征大鼠模型，闡明RBP4在中各組織的表達水平，并研究大鼠血清RBP4與炎癥因子IL-6以及氧化應激指標丙二醛的關系，進一步闡明RBP4與代謝綜合征的關系。
　　 材料與方法：7周齡雄性健康SD大鼠25只，體重(250±20)g。普通飼料喂養(yǎng)1周后隨機分成2組：對照組12只繼續(xù)普通飼料喂養(yǎng)，模型組13只給予高脂高鹽飼料；每月測量體重、

11、血壓、心率、空腹血糖、空腹胰島素，每2月測血脂，32周行有創(chuàng)血壓和心率檢查，高胰島素-正常血糖鉗夾試驗和葡萄糖耐量試驗。在32周時，以2％戊巴比妥鈉45mg/kg腹腔注射麻醉，測量鼻到肛門的長度為體長，并計算Lee's肥胖指數(shù)，開腹后迅速摘取心臟組織，肝臟組織，附睪脂肪組織制成冰凍切片，應用RT-PCR，Western-blot和免疫組化的方法測定和比較各組織中RBP4的表達。利用ELISE法測定大鼠血清中RBP4，IL-6，丙二醛的濃

12、度。
　　 小結(jié)：1、MS大鼠血清RBP4顯著高于NC組；
　　 2、MS大鼠肝臟組織、附睪脂肪組織的RBP4mRNA顯著高于NC組，心肌組織的RBP4mRNA與NC組相比無明顯差異。MS大鼠肝臟組織、脂肪組織的脂聯(lián)素mRNA顯著低于NC組，心臟脂聯(lián)素mRNA與NC組無明顯差異；
　　 3、代謝綜合征大鼠血清炎癥因子和氧化應激產(chǎn)物升高明顯。
　　 第三部分辛伐他汀對3T3-L1誘導的脂肪細胞視黃醇結(jié)合蛋白

13、4表達的影響
　　 目的：本實驗嘗試在細胞水平上研究以辛伐他汀為代表的他汀類藥物對于3T3-L1誘導的脂肪細胞中視黃醇結(jié)合蛋白4表達是否有調(diào)控作用，以進一步研究他汀類藥物在代謝綜合征中的重要作用。
　　 材料與方法：培養(yǎng)3T3-L1小鼠前脂肪細胞誘導8-12天后為成熟的脂肪細胞，后加入辛伐他汀干預。分對照組、辛伐他汀0.1uM24小時、1uM24小時、0.1u M48小時、1uM48小時五組。應用RT-PCR，Weste

14、rn-blot的方法測定和比較各組RBP4的表達，用ELISE法測定各組中IL-6，丙二醛的濃度。
　　 小結(jié)：
　　 1、辛伐他汀對于小鼠脂肪細胞RBP4有抑制作用，隨時間和濃度增加而抑制作用明顯；
　　 2、辛伐他汀對于脂肪細胞中炎性因子IL-6和氧化應激指標MDA有明顯抑制作用。
　　 結(jié)論：
　　 1、RBP4與冠心病可能無顯著相關性，但與血糖、血脂、血壓等與胰島素抵抗有關指標有著不同程度