性腺激素對初情大鼠生殖軸上NKB、GnRH和Kisspeptin表達的影響.pdf

1、初情期啟動的早與遲直接影響動物的性成熟和以后的繁殖性能，但其機制仍不清楚。研究表明，在動物初情期發(fā)育的調控中，下丘腦促性腺激素釋放激素（gonadotropin releasinghormone，GnRH）神經元所分泌的GnRH是初情期啟動的決定性因素。一般認為，動物在初情期之前，下丘腦GnRH神經元對性腺類固醇激素的負反饋作用十分敏感，因而在出生后到初情期前這段時間，下丘腦GnRH的分泌因受性腺類固醇激素的作用而一直處于抑制狀態(tài)，呈現(xiàn)

2、低幅度、低頻率的分泌脈沖；初情期的啟動始于下丘腦性腺激素抑制機制的解除，但GnRH神經元上并沒有性腺激素受體，那么，在性腺激素調節(jié)GnRH分泌機制中，應該有對性腺激素敏感的其他中間神經元介導性腺激素對GnRH的調節(jié)作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，神經激肽B（neurokininB，NKB）和Kisspeptin神經元上均有性腺激素受體的表達，二者均能促進GnRH釋放和初情期啟動。因此，探究動物初情期啟動中NKB、Kisspeptin、GnRH和性腺

3、激素受體間的關系尤為重要。
　　目前國內外關于NKB、Kisspeptin和GnRH的研究，多集中于NKB、Kisspeptin和GnRH在不同物種中樞神經系統(tǒng)上的定位和其與初情期的關系的研究，缺少對其在生殖軸上整體的定位研究以及對Kisspeptin、NKB和GnRH與性腺激素水平關系的研究。本試驗以皮下埋植性腺激素、卵巢摘除等處理方法，以雌性SD大鼠為研究對象，采用免疫熒光三標技術來觀察各個組大鼠生殖軸上NKB、Kisspep

4、tin和GnRH的分布情況，運用Image J和Image-pro plus6.0軟件分別計數(shù)和測量各組大鼠生殖軸上NKB、Kisspeptin和GnRH的陽性細胞數(shù)和平均熒光強度，并分析其間的關系及變化規(guī)律。同時結合實時熒光定量PCR、酶聯(lián)免疫和放射性免疫等分析方法，來闡述NKB、Kisspeptin和GnRH在機體性腺激素水平改變時的變化及其三者間潛在的聯(lián)系，為進一步研究NKB、Kisspeptin和GnRH在雌性大鼠生殖功能上的作

5、用及其機制提供科學的理論依據(jù)。
　　結果顯示：（1）E2（29±0.71d）、E2+P4（28±1.53d）、OVX+E2（30±0.38d）、OVX+E2+NKB（28±1.18d）和OVX+E2+P4+NKB（28±0.52d）組大鼠均比Oil（43±1.38d）組大鼠陰門開啟的時間顯著提前（P<0.01），且這五組間差異不顯著（P>0.05）。（2） NKB主要分布于大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和腹內側核，腺垂體以及卵巢的黃體

6、細胞、卵泡膜、顆粒細胞和間質細胞上，且不同部位表達的熒光強度存在差異（P<0.05）。①大鼠弓狀核上的免疫熒光強度顯著高于室旁核和腹內側核（P<0.05）。②卵巢摘除組的大鼠弓狀核上NKB陽性神經元數(shù)顯著高于E2和E2+P4組（P<0.05），大鼠室周核上的NKB陽性細胞數(shù)目較少（P<0.05），且僅在OVX+E2+P4+NKB、OVX+E2+P4和E2+P4組中分布。③Oil組大鼠下丘腦和腺垂體上的NKB熒光信號顯著強于E2、E2+P

7、4、OVX+E2和OVX+E2+P4組（P<0.05）。④大鼠卵巢黃體細胞、卵泡膜和顆粒細胞上的平均熒光強度顯著高于間質細胞（P<0.05）。（3）GnRH主要分布于大鼠下丘腦的正中隆起、弓狀核和視前區(qū)，且以正中隆起處的熒光信號最強（P<0.05）。①E2和E2+P4組大鼠，其下丘腦GnRH的陽性細胞數(shù)高于卵巢摘除大鼠（P<0.05）。②大鼠正中隆起處GnRH的平均熒光強度顯著高于弓狀核和視前區(qū)（P<0.05），且同一核團上，E2和E2

8、+P4組大鼠GnRH的平均熒光強度值也較高（P<0.05）。（4）Kisspeptin主要分布于大鼠下丘腦弓狀核、室旁核、視前區(qū)和室周核。①Kisspeptin的陽性細胞數(shù)目以弓狀核最高，室旁核和視前區(qū)次之，室周核較少（P<0.05）。埋植性腺激素的大鼠室周核上Kisspeptin的陽性細胞數(shù)目增多（P<0.05）。（5） OVX+E2、OVX+E2+P4、OVX+Oil、OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil

9、+NKB組大鼠下丘腦Tac-2、GnRH、Kiss-1的基因表達量顯著高于E2、E2+P4和Oil組（P<0.05）。OVX+E2+NKB、OVX+E2+P4+NKB和OVX+Oil+NKB組大鼠下丘腦ERα的基因表達量顯著高于E2、E2+P4和Oil。且ERα與Tac-2和GnRH基因表達呈正相關，而Kiss-1與ERα基因呈負相關。（6）Oil組大鼠血清中NKB的含量顯著高于OVX+E2和OVX+Oil組（P<0.05）。OVX+E

10、2+P4+NKB、OVX+E2+NKB和E2+P4組血清中NKB的含量差異不顯著（P>0.05）。 E2和OVX+Oil+NKB組大鼠血清中的NKB含量最低（P<0.05）。（7）E2+P4和E2組大鼠外周血液中的雌二醇濃度顯著高于其他各組（P<0.05），E2+P4、E2、OVX+E2+P4和Oil組大鼠血液中的孕酮含量最高（P<0.05）。（8）NKB與雌二醇的相關性系數(shù)值為-0.81423，呈高度負相關；NKB與孕酮的相關性系數(shù)值

11、為-0.478593，呈低度負相關。
　　根據(jù)以上結果得出結論：（1）雌二醇和NKB能夠誘導大鼠初情期啟動時間提前。（2）NKB主要分布在大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和腹內側核，腺垂體以及卵巢的黃體細胞、顆粒細胞、卵泡膜和間質細胞上；Kisspeptin主要分布在大鼠下丘腦的弓狀核、室旁核和視前區(qū)；GnRH主要分布在大鼠下丘腦的正中隆起、弓狀核和視前區(qū)。且NKB、Kisspeptin在GnRH分布的關鍵區(qū)域弓狀核高度表達，提示NKB