羅布麻葉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析以及與半乳凝集素的相互作用.pdf

1、羅布麻(Apocynum venetum Linn)是我國的傳統(tǒng)中藥，其葉具有降血壓、降血脂、肝保護(hù)和抗抑郁等活性。現(xiàn)如今，有關(guān)羅布麻葉的文獻(xiàn)報(bào)道近20篇，主要集中在多酚類及糖苷類，尚缺乏對(duì)羅布麻葉多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析和生物活性的報(bào)道。
　　 本文對(duì)羅布麻葉多糖進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化，進(jìn)一步研究了各級(jí)分的單糖組成，理化性質(zhì)及分子量，并對(duì)獲得的均一多糖級(jí)分的結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了詳細(xì)的分析。
　　 干燥的羅布麻葉經(jīng)過熱水煮提、乙

2、醇沉淀和Sevag法脫蛋白得到羅布麻葉水溶性粗多糖ALP(5.8％)，其單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，摩爾比為0.29:1.0:0.55:3.88:1.12:2.20:1.29。ALP經(jīng)過DEAE-Cellulose柱層析分級(jí)，得到一個(gè)中性糖級(jí)分ALPN和兩個(gè)酸性糖級(jí)分ALPA-1和ALPA-2。這三個(gè)級(jí)分均進(jìn)行了含量、組成以及分子量的分析。ALPA-I和ALPA-2進(jìn)一步通過Sepharo

3、se CL-6B分級(jí)得到兩個(gè)較均一的級(jí)分ALPA-1a和ALPA-2a。
　　 通過凝膠滲透色譜和高效液相色譜驗(yàn)證ALPA-la和ALPA-2a兩者為均一的多糖級(jí)分，ALPA-la主要由半乳糖(37.55％)、阿拉伯糖(36.92％)、鼠李糖(9.93％)及半乳糖醛酸(8.2％)組成，其分子量為5.0x104 Da，半乳糖和阿拉伯糖占總糖的50％以上，同時(shí)Rha/GalA和Gal/Ara均接近1：l。利用13C核磁共振分析發(fā)現(xiàn)，

4、ALPA-1a是以a-D-GalpA-(1，2)-a-L-Rhap為主鏈，帶有阿拉伯半乳聚糖側(cè)鏈的多糖，推測(cè)其為I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果膠。而ALPA-2a主要由鼠李糖(7.38％)、半乳糖醛酸(67.29％)、葡萄糖(8.29％)、半乳糖(7.07％)和阿拉伯糖(5.43％)組成，其中半乳糖醛酸的比例占總糖的70％左右，其分子量為1.8xl04Da。應(yīng)用紅外光譜、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解和13C核磁共振波譜法(

5、13CNMR)對(duì)ALPA-2a進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析。研究發(fā)現(xiàn)，ALPA-2a中的半乳糖醛酸主要以a-D-(1，4)連接構(gòu)成主鏈，還有少量鼠李糖以(1，2)連接方式連接在側(cè)鏈，同時(shí)，側(cè)鏈的Ara和Gal以arabino-(3，6)-galactan方式連接。根據(jù)結(jié)果推測(cè)：ALPA-2a為富含有聚半乳糖醛酸(HG)結(jié)構(gòu)域的果膠類多糖，并帶有少量的RG-I型結(jié)構(gòu)域。
　　 在血細(xì)胞凝集阻抑實(shí)驗(yàn)中，ALPA-lb和ALPA-2a表現(xiàn)出明顯的抑制

6、血細(xì)胞凝集的活性，即這兩個(gè)HG型果膠級(jí)分與半乳凝集素-3(Galectin-3)有很強(qiáng)的結(jié)合能力。此外，RG-I型果膠級(jí)分ALPA-la與Galectin-3也具有較強(qiáng)的結(jié)合能力，而AG型果膠級(jí)分ALPN與Galectin-3幾乎沒有結(jié)合能力。比較各級(jí)分的結(jié)構(gòu)特征，我們推測(cè)：從羅布麻葉分離得到的果膠中HG型結(jié)構(gòu)級(jí)分與Galectin-3的結(jié)合能力強(qiáng)于RG-I型級(jí)分，而具AG型結(jié)構(gòu)的果膠級(jí)分幾乎不與Galectin-3結(jié)合，這可能是由于H