豆類(lèi)凝集素的提取分離及純化.pdf

1、凝集素是一種能夠特異性結(jié)合碳水化合物的蛋白或者糖蛋白。凝集素廣泛地存在于自然界的多種生物中,尤其在豆子的種籽中含量非常豐富。通常采用血凝試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證凝集素的存在。凝集素在生物固氮、先天免疫、細(xì)胞毒性等方面發(fā)揮作用,且實(shí)驗(yàn)證明凝集素具有促有絲分裂、抗增殖、抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶等多種活性。凝集素在豆類(lèi)中的含量受到豆類(lèi)的種屬、產(chǎn)地等多種因素的影響,但是目前對(duì)于多種豆類(lèi)中凝集素的活性及分布等的研究報(bào)道較少。為便于對(duì)凝集素進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用,本研究

2、選取23種不同種屬、不同地區(qū)的食用豆類(lèi),對(duì)凝集素的總活力及特異性活力進(jìn)行測(cè)定及考察;以小黑蕓豆為例,探討了粗提取因素對(duì)凝集素提取的影響,確定了硫酸銨分級(jí)沉淀的飽和度范圍,并通過(guò)DEAE-52及S-200純化得到凝集素純品;通過(guò)提取、分離及純化得到了4種蕓豆凝集素的純品,并測(cè)定出凝集素亞基的分子量。
　　本文首先對(duì)23種不同食用豆類(lèi)的水溶性蛋白含量、總活力及特異性活力進(jìn)行測(cè)定,探討了種屬、地域?qū)τ诙诡?lèi)凝集素的總活力及特異性活力的影響

3、。并以小黑蕓豆為例,考察了種籽不同部位的凝集素分布情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明菜豆屬的豆類(lèi)總活力及特異性活力整體較高,最高的為紅蕓豆,有兩種蕓豆未表現(xiàn)出凝集活性;豇豆屬及大豆屬的凝集素總活力及特異性活力顯著低于菜豆屬;子葉中凝集素總活力及特異性活力均最高,種皮中無(wú)凝集素檢出。
　　此外,以小黑蕓豆為例研究了粗提取條件,確定硫酸分級(jí)沉淀范圍及DEAE-52、S-200的實(shí)驗(yàn)條件;純化4種蕓豆凝集素并測(cè)定了分子量。研究結(jié)果表明選pH7.2的磷酸

4、鹽緩沖溶液、料液比1:10、提取時(shí)間18h作為提取條件,此時(shí)測(cè)得的蛋白含量為7.61g/100g、總活力為11.3×107HU、特異性活力為17.53×103HU。硫酸銨分級(jí)沉淀范圍選為20％~80%時(shí)的純化倍數(shù)為1.11倍,經(jīng)DEAE-52及S-200后的純化倍數(shù)為9.42倍。相同方法測(cè)得紅蕓豆、花蕓豆及大白蕓豆中的凝集素含量分別為437mg/100g、296mg/100g、178mg/100g,比活力分別為311.67×103HU/