急性壞死性胰腺炎大鼠腸梗阻機(jī)制及奧曲肽干預(yù)對(duì)腸道動(dòng)力的影響.pdf

1、目的:急性胰腺炎是臨床上嚴(yán)重威脅生命的常見(jiàn)疾病，其總死亡率是10-25％，重癥胰腺炎死亡率接近30-40％。40-70％的急性壞死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis，ANP)的病人出現(xiàn)的繼發(fā)性胰腺感染成為晚期死亡率的最重要的決定因素。現(xiàn)有很多研究證實(shí)了ANP急性期的胃腸動(dòng)力改變，推測(cè)動(dòng)力障礙與導(dǎo)致腹腔內(nèi)器官感染的細(xì)菌的過(guò)度生長(zhǎng)相關(guān)，參與了全身性炎癥反應(yīng)和難治的多器官功能衰竭的病理生理過(guò)程。然而導(dǎo)致AN

2、P相關(guān)的腸梗阻的潛在機(jī)制目前并不明確，其發(fā)生原因可能包括調(diào)節(jié)動(dòng)力的神經(jīng)源性(腸神經(jīng))或肌源性(平滑肌，interstitial cells of Cajal，ICC)機(jī)制的損傷或改變。本課題旨在探究ANP病程中小腸動(dòng)力的損害，及其相關(guān)肌源性(ICC)和神經(jīng)源性機(jī)制及奧曲肽干預(yù)對(duì)腸道動(dòng)力的影響及其相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:采用雄性SD大鼠腹腔內(nèi)注射30％L-鳥(niǎo)氨酸(3g/kg)的方法建立ANP模型，藥物干預(yù)采用奧曲肽，每8h皮下注射

3、。從功能學(xué)、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)三方面，觀(guān)察造模后24h、48h、72h小腸動(dòng)力相關(guān)的ICC、平滑肌和腸神經(jīng)的變化及給予奧曲肽干預(yù)對(duì)這些動(dòng)力相關(guān)機(jī)制的影響。功能學(xué)分為在體小腸埋置電極記錄其肌電活動(dòng)的慢波和移行性肌電復(fù)合波(migrating myoelectric complexs，MMC)和離體器官浴槽灌流技術(shù)記錄小腸的自發(fā)收縮情況和相關(guān)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)。形態(tài)學(xué)包括觀(guān)察胰腺病理、ICC和神經(jīng)源性一氧化氮合酶(neuronal nitric o

4、xide synthase，nNOS)、膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(cholineacetyltransferase， CHAT)、生長(zhǎng)抑素(Somatostatin，SST)受體陽(yáng)性神經(jīng)的免疫熒光實(shí)驗(yàn)。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)包括研究ICC、nNOS和CHAT的蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.ANP大鼠在造模后24h、48h和72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均出現(xiàn)急性壞死性胰腺炎的胰腺典型病理表現(xiàn)。
　　 2.急性壞死性胰腺炎大鼠造模后24

5、h小腸推動(dòng)率降低(P=0.002)；較造模前基礎(chǔ)值相比，小腸肌電活動(dòng)出現(xiàn)慢波主功率和主頻率均降低(主頻率：P=0.005；主功率：P=0.034)，快波的MMC周期延長(zhǎng)(P=0.052)；小腸自發(fā)收縮的振幅較對(duì)照組降低(P=0.004)；藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)ACh的反應(yīng)較對(duì)照組減弱(P=0.05)，而對(duì)KCI的反應(yīng)較對(duì)照組無(wú)顯著變化(P=0.505)，對(duì)照組加入TTX后收縮張力減弱(P=0.045)而ANP組則未出現(xiàn)此變化(P=0.197)，對(duì)

6、L-NNA的反應(yīng)ANP組亦較對(duì)照組減弱(P=0.042)。免疫熒光觀(guān)察發(fā)現(xiàn)ICC的兩個(gè)亞型ICC-MY和ICC-DMP的熒光密度均較對(duì)照組減弱(ICC-MY，P=0.000；ICC-DMP，P=0.000)，PGP9.5標(biāo)記的腸神經(jīng)熒光密度較對(duì)照組減弱(P=0.001)，nNOS神經(jīng)元數(shù)目也較對(duì)照組減少(P=0.000)。Western blot顯示nNOS蛋白表達(dá)較對(duì)照組減弱(P=0.032)。
　　 3.造模后24h、48h

7、和72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀(guān)察到，ANP+生理鹽水組慢波的主頻率均較基礎(chǔ)值顯著降低(24h，P=0.046;48h，P=0.017；72h,P=0.004)；而ANP+奧曲肽組則在造模后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)較基礎(chǔ)值均無(wú)顯著差別；而在同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，ANP48h和ANP72h，給予ANP+奧曲肽組主頻率明顯高于ANP+生理鹽水組(48h，P=0.021；72h，P=0.081)。ANP+生理鹽水組MMC周期在48h和72h時(shí)間點(diǎn)較基礎(chǔ)值顯著延長(zhǎng)(48h，P=

8、0.002；72h，P=0.006)，此變化趨勢(shì)未發(fā)現(xiàn)于ANP+奧曲肽組；同慢波主頻率變化類(lèi)似，同一時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，ANP48h和ANP72h ANP+奧曲肽組MMC周期顯著較ANP+生理鹽水組縮短(48h，P=0.005；72h，P=0.004)。免疫熒光結(jié)果顯示：ICC-DMP在48h和72h時(shí)間點(diǎn)，ANP+奧曲肽組較ANP+生理鹽水組累計(jì)熒光密度顯著增強(qiáng)(48h，P=0.028；72hP=0.01)。Western blot顯示在72h

9、時(shí)間點(diǎn)c-Kit的蛋白表達(dá)ANP+奧曲肽組顯著高于ANP+生理鹽水組(P=0.017)。
　　 4.小腸離體收縮振幅在ANP造模后24h和48h時(shí)間點(diǎn)，ANP+生理鹽水組較對(duì)照組有顯著減低(24h，P=0.004；48h，P=0.011)，而此變化趨勢(shì)未發(fā)現(xiàn)于ANP+奧曲肽組；在對(duì)照組內(nèi)和ANP24 h和48 h時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，各自小腸收縮振幅奧曲肽干預(yù)組均優(yōu)于生理鹽水干預(yù)組(對(duì)照組內(nèi)，P=0.016；ANP24 h內(nèi)，P=0.000

10、；ANP48 h內(nèi)，P=0.008)。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)小腸收縮振幅對(duì)ACh的反應(yīng)，在24h時(shí)間點(diǎn)，ANP+奧曲肽組顯著大于ANP+生理鹽水組(P=0.002)；對(duì)L-NNA的收縮反應(yīng)，在24h時(shí)間點(diǎn)，ANP+奧曲肽組與ANP+生理鹽水組有顯著差異(P=0.053)。免疫熒光結(jié)果顯示CHAT陽(yáng)性神經(jīng)元ANP+生理鹽水組造模后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照顯著減少(24h，P=0.000；48h，P=0.000；72h，P=0.005)；而在24h和48

11、h時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，ANP+奧曲肽組的CHAT陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目高于無(wú)干預(yù)組(24h，P=0.034；48h，P=0.024)。與CHAT神經(jīng)類(lèi)似，nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元在ANP+生理鹽水組造模后三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照顯著減少(24h，P=0.000;48h，P=0.000；72h，P=0.000)；而在24h和48h時(shí)間點(diǎn)內(nèi)，ANP+奧曲肽組的nNOS陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目高于ANP+生理鹽水組(24h，P=0.003；48h，P=0.046)。Western

12、blot在ANP24h時(shí)間點(diǎn)奧曲肽干預(yù)組較生理鹽水干預(yù)組CHAT神經(jīng)的蛋白表達(dá)增高(P=0.057)。而nNOS神經(jīng)的蛋白表達(dá)則在48h時(shí)間點(diǎn)奧曲肽干預(yù)組顯著高于生理鹽水組(P=0.032)。
　　 結(jié)論:ANP病程中出現(xiàn)小腸動(dòng)力功能紊亂，其潛在機(jī)制涉及調(diào)節(jié)動(dòng)力的神經(jīng)源性(腸神經(jīng)：nNOS、CHAT神經(jīng)元)或肌源性(平滑肌、ICC)機(jī)制的改變。奧曲肽的干預(yù)，一定程度上保護(hù)了ICC和nNOS、CHAT神經(jīng)，部分逆轉(zhuǎn)了其相關(guān)動(dòng)力障礙